Source: http://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/methods/microscopy/microscopy.html
Светлост микроскоп, тзв јер користи видљиву светлост да детектује мале објекте, је вероватно најпознатији и добро користи средство за испитивање у биологији. Ипак, многи ученици и наставници су свесни пуном опсегу могућности које су доступне у светлосним микроскопом. Пошто трошкови ан расте инструмената са својим квалитетом и разноврсношћу, најбољи инструменти су, нажалост, недоступан за већину академских програма. Међутим, чак и најјефтинији “Студент” микроскопи могу да обезбеде спектакуларан поглед на природу и могу да омогући студентима да обављају неке разумно софистициране експерименте.
Почетник тежи да мислите да је изазов гледања мале објекте лежи у добијању довољно увећање. У ствари, када је у питању гледајући живих бића највећи изазови су, како,
- добијање довољно контраста
- проналажење Фоцал Плане
- добијање добру резолуцију
- препознавање предмета када се не види
Најмање предмети за које се сматра да живе су бактерије. Најмањи бактерије могу се посматрати и облик ћелија се признају по једва 100к увећањем. Они су невидљиви у светлом пољу микроскопа, ипак. Ове странице ће описати врсте оптике које се користе за добијање контраста, предлози за проналажење примерака и фокусирање на њих, и савете о коришћењу мерних уређаја са микроскопом светлости.
Врсте лаких микроскопа
микроскоп јарка поље је најпознатији студентима и највероватније се може наћи у учионици. Боље опремљене учионице и лабораторије могу да имају тамну поље и / или фазни контраст оптику. Диференцијални контраст интерференције, Номарски, Хоффман модулација контраст и варијације производе значајну дубину резолуције и тродимензионалним ефектом. Флуоресцентне и конфокалних микроскопи су специјализовани инструменти који се користе за истраживање, клиничка и индустријске примене.
Осим микроскопом једињења, једноставнији инструмент за ниску употребу увећања могу се наћи у лабораторији. мицросцопе стерео микроскоп или дисекцију обично има бинокуларну окулара цев, дуго радно растојање, и низ увећања типичније од 5к до 35 или 40к. Неки инструменти снабдевање сочива за више увећања, али нема побољшања у резолуцији. Таква “лажно увећање” је ретко вреди трошак.
Бригхт Поље микроскопија
Са конвенционалним светлом микроскопом на терену, светлост из извора, сијалица има за циљ ка објектив испод бине под називом кондензатор, преко узорка, преко објектива, а на оку кроз другу повећало сочива, окулар или окулар. Видимо објекте у светлу пут, јер природни пигментација или мрље апсорбују светлост различито, или зато што су згусне да апсорбују значајну количину светлости упркос томе што безбојан. Парамециум треба да се појави прилично добро у светлом микроскопом на терену, иако неће бити лако видети ЦИЛИА или највише органеле. Дневна бактерије неће појавити на све осим гледалац погоди жижну раван за срећу и искривљује слику помоћу максимално контраст.
Добар микроскоп квалитет има уграђен осветљивач, прилагодљив кондензатор са дијафрагма (контраста) контрола, механичко фаза и бинокуларном окулара цеви. Кондензатор се користи да се фокусира светлост на узорку кроз отвор у фази. Након проласка кроз узорак, светло се приказује на оку са очигледном области која је много већа од површине осветљен. Увећање слике је једноставно циљ увећање објектива (обично утиснут на телу објектива) пута очна увећање.
Студенти су углавном свесни употребе фине фокус потенциометара, који се користи за оштрење слику узорку. Они су често несвесни прилагођавања кондензатора који могу да утичу на резолуцију и контраст. Неки кондензатори су фиксирани у позицији, други су Фоцусабле, тако да је квалитет светлости може да се подеси. Обично је најбоља позиција за фоцусабле кондензатора је близу бине могуће. Светао поље кондензатора обично садржи дијафрагма, уређај који контролише пречник рефлектора долази се кроз кондензатор, тако да када се дијафрагма заустави (скоро затворена) светлост долази усправно кроз центар кондензатора објектива и контраст је висока. Када је мембрана је широм отворена је слика светлија и контраст је ниска.
Недостатак ослањања искључиво на дијафрагма за разлику да иза оптималном тренутку више контраст да произведе што више искривљују слику. Са малим, неумрљан, унпигментед узорку, ти си обично поред оптималне разлику када почнете да види слику.
Користећи светле микроскоп фиелд
Прво, размислите о томе шта желите да урадите са микроскопом. Која је максимално увећање вам треба? Гледаш само обојени узорак? Колико контраст / резолуција ти треба? Следеће, започели подешавање за гледање.
Монтирање узорак на сцени
Покровно мора бити горе ако постоји. Високи увећања објективни сочива не може да се фокусира кроз густу стаклену плочицу; морају бити изведени у близини узорка, због чега поклопцима су тако танки. Бина може бити опремљен са једноставним исечци (јефтинији микроскопа), или са неком врстом држач. Овај слајд може захтевати за коришћење позиционирање, или може бити механички фаза (пожељна) који омогућава прецизно позиционирање без додиривања слајд.
Оптимизира осветљење
Извор светлости треба да имају широк динамички опсег, да обезбеди велике јачине осветљења на високим увећањем, и ниже интензитета, тако да корисник може да види удобно на ниским увећања. Бољи микроскопи имају уграђен илуминатор, а најбољи микроскопи имају контролу над интензитет светлости и облика светлосног зрака. Ако ваш микроскоп захтева екстерни извор светлости, уверите се да је светлост усмерена ка средини кондензатора. Подесите осветљење тако да је поље је светао, без боли очи.
Подесите кондензатор
Да бисте подесили и поравнајте микроскоп, почети читањем упутство. Ако нема приручник је доступан, покушајте да користите ове смернице. Ако је кондензатор је Фоцусабле, поставите га са објективом што ближе отвору у фази као што можете га добити. Ако је кондензатор има могућност одабира опције, поставите га на светлом пољу. Почните са дијафрагма бленде заустави (Хигх Цонтраст). Требало би да види светлост која долази се кроз сјаја примерак промена као што померите дијафрагма полугу.
Размислите о томе шта тражите
То је много теже наћи нешто кад немате очекивања у погледу његовог аппреаранце. Колики је? Да ли ће се преселити? Да ли је пигментирани или обојене, и ако је тако што је његова боја? Где очекујеш да га пронађу на слајду? На пример, ученици обично имају доста проблема да обојене бактерије јер голим оком и при ниским увећања ствари изгледа као прљавштина. То помаже да се зна да је мрље осуше доле обично оду прстенове тако да ивица бриса обично има најгуи концентрацију ћелија.
Фокус, лоцирати, и Центар за узорак
Почните са објектива најниже увећања, до куће у на узорку и / или дела узорка који желите да испита. То је прилично лако наћи и фокусирати се на деловима ткива, нарочито ако су фиксиране и обојене, као и код већине припремљеним слајдова. Међутим, то може бити веома тешко лоцирати живота, минуте примерци као што су бактерије или унпигментед протиста. Суспензија ћелија квасца чини добра пракса узорак за проналажење тешке предмете.
- Користити режим тамно терену (ако постоји) да пронађе неумрљан примерака. Ако не, почните са високим контрастом (дијафрагма затворена).
- Почните са узорком од фокуса, тако да је фаза и циљ мора бити зближили. Прва површина да дођу у фокусу као што доноси фазу и циљ заједно је на врху плочици. Са брисева, маска клизање се често не користи, тако да је прва ствар коју видиш је сама брис.
- Ако имате проблема, фокусирати на ивици поклопца листић или ваздушног мехура, или нешто што лако може препознати. Горња ивица на плочици долази у фокус прво, а затим на дно, која треба да буде у истој равни као и своје узорку.
- Када сте пронашли примерак, подешавање контраста и интензитет осветљења, и померите слајд около док имате добар простор за гледање.
Прилагодите раздвајање окулара, фокус
Са једним окулар, нема никакве везе са окулар, осим да остане чиста. Са бинокуларног микроскопом (пожељна) морате да подесите одвајање окулара баш као и ти двоглед. Бинокуларни визија је много осетљивији на светлост и детаљније него моноцулар визије, тако да ако имате бинокуларну микроскоп, искористи то.
Један или оба окулара може бити телескопска окулар, то јест, можете га фокусирати. Од веома мали број људи има очи да се савршено подударају, већина нас треба да се фокусира један окулар да одговара другу слику. Поглед са одговарајућим оком у фиксном окулар и фокусирати са микроскоп точкић. Следеће, погледати у подесив окулар (са другом оку наравно), и подесите окулар, а не микроскоп.
Изаберите неку објективну објектив за гледање
Најнижи објектив снага је обично 3,5 или 4к, а првенствено користи за иницијално проналажење примерака. Понекад ми то зовемо скенирање објектив из тог разлога. Најчешће се користи објектив је 10к објектив, који даје коначну увећање од 100к са очног сочива 10к. За врло мале протиста и за детаље у припремљене слајдове, као што су ћелијских органела или митозе личности, биће вам потребан већи увећање. Типични сочива високог увећања су 40к и 97к или 100к. Последња два увећања се користе искључиво уљем у циљу побољшања резолуције.
Кретање у увећањем од корацима. Сваки пут када одете на виши циљ енергије, ре-фокусом и поновног центру узорка. Виши увећања сочива морају бити физички ближи самом узорку, што представља ризик за ометање циља у узорку. Будите веома опрезни приликом изучавања. Узгред, квалитетни сетови сочива су парфоцал, који је, када се пребаците увећања је примерак остаје у фокусу или близу фокусиран.
Веће није увек боље. Сви узорци имају три димензије, а уколико примерак је изузетно танак нећете моћи да се фокусира са великим увећањем циља. Што је увећање веће, теже је да се “потера” покретни примерак.
Подесите осветљење за одабрану објектива
Очигледна поље једног окулара је константна независно од увећања користи. Дакле, из тога следи да када се подигне увећање подручје осветљени узорка које видите је мањи. Пошто гледате мањем простору, мање светла достигне око, а слика потамни. Са ниским циљем снаге можда морати да смањи интензитет осветљења. Са великом снагом ти потребна сва светла можете добити, посебно са јефтинијим микроскопа.
Када користити светлом пољу микроскопије
Бригхт поље микроскопија је најбоље да прегледају обојене или природно пигментних примерака, као што су обојени припремљени слајдови секција ткива или живе организме фотосинтетички. То је бескорисно за живот узорке бактерија, и инфериорне за не-фотосинтетских протиста или метазоа или неумрљан ћелија суспензије или пресецима ткива. Овде је не тако комплетна листа примерака који могу бити посматране коришћењем светло-поља микроскопа, и одговарајуће увећања (пожељни крајњи увећања се истакао).
- Припремљени слидес, обојени – бактерије (1000к), дебели профили ткива (100к, 400к), танки секције сажете хромозома или специјално патнами органела (1000к), велике протиста или метазоа (100к).
- Размази, обојене – блоод (400к, 1000к), негативне запрљане бактерија (400к, 1000к).
- Дневна препарати (влажне носачи, неумрљан) – рибњак вода (40к, 100к, 400к), који живе протиста или метазоа (40к, 100к, 400к повремено), алге и други микроскопска садног материјала (40к, 100к, 400к). Мањи примерци ће бити тешко посматрати без изобличења, нарочито ако немају пигментацију.
Брига о микроскоп
- Све на добром микроскопом квалитета је невероватно скупо, па будите опрезни.
- Држите микроскоп чврсто штанда, само. Никада га зграби носиоца окулара, на пример.
- Држите утикач (а не кабл) када искључите осветљење.
- Пошто сијалице су скупи, и имају ограничен век, искључите осветљење искључује када завршите.
- Увек проверите да ли је фаза и сочива су чисти пре стављања далеко микроскоп.
- Никада не користите папирни убрус, а кимвипе, кошуљу, или било који други од добре ткива квалитет сочива или вате материјала (мора бити 100% природни памук) да очистите оптички површину. Буди нежан! Можете користити одговарајући за чишћење објектива или дестиловану воду да помогне да се отстрани осушени материјал. Органски растварачи могу раздвојити или оштети елементе објектива или премаза.
- Покрити инструмент са јакне прашине када није у употреби.
- Фокусирати глатко; не покушавају да убрзају кроз процес фокусирања или на силу ништа. На пример, ако наиђете на повећану отпорност приликом изучавања онда вероватно сте достигли лимит и идете у погрешном правцу.