"Паразитологические методы лабораторной диагностики гельминтозов и протозоозов. Методические указания. МУК 4.2.735-99" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 25.02.1999)

УТВЕРЖДАЮ
Главный государственный
санитарный врач Российской Федерации -
Первый заместитель Министра
здравоохранения Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
25 февраля 1999 г.
Дата введения: 25 апреля 1999 г.
ГОСУДАРСТВЕННАЯ СИСТЕМА САНИТАРНО - ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО
НОРМИРОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
3.2. ПРОФИЛАКТИКА ПАРАЗИТАРНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ГЕЛЬМИНТОЗОВ И ПРОТОЗООЗОВ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.2.735-99
1. Подготовлены сотрудниками Федерального центра государственного санитарно - эпидемиологического надзора Минздрава России: к.б.н. Цыбиной Т.Н., Сысковой Т.Г. и сотрудниками Института медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И.Марциновского Минздрава России: к.м.н. Плющевой Г.Л., к.б.н. Гордеевой Л.М., к.м.н. Чернышенко А.И., д.м.н. Сергеевым В.П., д.м.н. Романенко Н.А., к.м.н. Продеус Т.В.
2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем министра здравоохранения Российской Федерации.
3. Введены впервые.
1. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ И НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ
Лабораторные исследования на гельминтозы и протозоозы проводятся клинико - диагностическими лабораториями лечебно - профилактических учреждений, ведомственными лабораториями (НИИ, вузов, военных госпиталей, частных клиник и т.п.), а также другими лабораториями, имеющими лицензии или аккредитованными в системе Госстандарта и госсанэпиднадзора для проведения данных исследований в независимости от формы собственности.
На центры госсанэпиднадзора возлагается организация работы по обследованию населения на гельминтозы и протозоозы, методическое руководство, контроль за качеством работы, проводимой клинико - диагностическими лабораториями лечебно - профилактических учреждений и ведомственных лабораторий, обследование населения по эпидемиологическим показаниям и с консультативной целью.
Издание официальное Настоящие методические указания не могут
быть полностью или частично
воспроизведены, тиражированы и
распространены без разрешения
Департамента госсанэпиднадзора Минздрава
России.
В настоящих методических указаниях использованы ссылки на:
- Санитарные правила и нормы СанПиН 3.2.569-96 "Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации". Госкомсанэпиднадзор России. - М., 1988;

- Санитарные правила СП 3.1/3.2.558-96 "Общие требования по профилактике инфекционных и паразитарных заболеваний". Госкомсанэпиднадзор России. - М., 1997;
- Инструкция по проектированию санитарно - эпидемиологических станций. СН 535-81. Госгражданстрой. - М., 1982;
- Система аккредитации испытательных лабораторий (центров) государственной санитарно - эпидемиологической службы Российской Федерации. Минздрав России и Госстандарт России, Федеральный центр госсанэпиднадзора России. - М., 1997;
- Санитарные правила СП 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами". Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России. - М., 1999.
Настоящие методические указания являются обязательными при выполнении лабораторных исследований биологического материала от людей с целью обнаружения паразитирующих в организме гельминтов и простейших.
Насчитывается свыше 250 видов паразитирующих у человека гельминтов, вызывающих заболевания - гельминтозы. На территории нашей страны обнаружено около 100 видов гельминтов, из них более 20 имеют широкое, практически повсеместное распространение. К паразитарным заболеваниям относятся также протозойные инвазии, возбудителями которых являются простейшие одноклеточные организмы. В настоящее время известно около 50 видов простейших, способных вызывать у человека заболевания.
Важность качественной лабораторной диагностики паразитарных заболеваний определяется во многих случаях трудностью их клинической и эпидемиологической диагностики. Многие инвазии у людей, в т.ч. у детей, нередко протекают субклинически, латентно.
В связи с этим грамотная лабораторная диагностика инвазий приобретает неоценимое значение. Качество лабораторной диагностики и уровень выявляемости зависят от тщательного выполнения всех требований любой методики, правильного выбора материала для исследования, знания циклов развития гельминтов, простейших, а также путей выделения из организма человека, морфологического строения яиц гельминтов и различных форм простейших. На результат анализа также влияет: неправильный забор материала или длительное его хранение, а также отсутствие подготовки больного лечащим врачом перед лабораторным обследованием.
Разнообразие возбудителей, форм паразитирования, и способов выделения диагностических стадий определяет достаточно широкий спектр методов диагностики.
Методы лабораторной диагностики паразитарных заболеваний применяются:
- с диагностической целью;
- для контроля эффективности лечения паразитарных заболеваний;
- для оценки качества проведения комплекса противопаразитарных мероприятий;
- с целью выявления источников заражения;
- для установления уровня пораженности населения.
Данный документ включает паразитологические методы лабораторной диагностики наиболее распространенных паразитарных заболеваний.
2. ОТБОР ПРОБ И УСЛОВИЯ ДОСТАВКИ МАТЕРИАЛА В
ЛАБОРАТОРИЮ ДЛЯ ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
Материалом для лабораторных паразитологических исследований на гельминтозы и протозоозы служит различный биологический материал от человека: дуоденальное содержимое, кал, ректальная слизь, моча, мокрота, отделяемое бронхов, кровь, биопсийные ткани и др.
2.1. Отбор проб и доставка фекалий (кала)
- Фекалии после дефекации отбирают из разных участков в количестве не менее 50 г (объем примерно от чайной до столовой ложки).
- Помещают в чистую (прокипяченную), сухую, стеклянную или пластмассовую посуду с крышками.
- Стерильная стеклянная (пластиковая) посуда требуется при заборе кала для исследования на амебиаз.
- Кал должен быть доставлен в лабораторию и исследован в день дефекации, поэтому, как правило, доставляется утренний кал.
- Для обнаружения яиц стронгилоидеса кал доставляется и исследуется не позднее 1 ч после дефекации.
- Для обнаружения личинок стронгилоидеса, яиц анкилостомид и трихостронгилоид исследуется кал не позднее 4 ч после дефекации.
- Для обнаружения вегетативных (подвижных) форм дизентерийной амебы необходимо кал доставить и провести исследование не позднее 20 мин после дефекации или 40 мин, если это время кал сохранялся при температуре 4 град. С.
- Для обнаружения вегетативных форм кишечных простейших (лямблий, диэнтамебы и др.) в жидком и полуоформленном "стуле" время от дефекации до исследования должно быть по возможности сокращено до минимума (не более 1-1,5 ч).
2.1.1. Отбор проб фекалий в консерванты
Используется:
- при невозможности исследования кала сразу же после дефекации или в день поступления материала в лабораторию.
Физический способ хранения фекалий:
- при низкой температуре от 0 до 4 град. С не более суток. Химические консерванты
1. Жидкость Барбагалло: раствор формалина на физиологическом растворе (3 мл формалина 40% + 97 мл физраствора или 1 л дистиллированной воды + 30 мл формалина 40% + 8,5 г хлорида натрия).
2. Раствор формалина 4%-ный.
3. Смесь 4%-ного раствора формалина с равным количеством глицерина.
4. Раствор уксусной кислоты от 3 до 10%.
5. Растворы детергентов 1-1,5%-ные - моющие средства типа "Лотос", "Экстра" (кроме биоактивных); перед приготовлением раствора из порошка удаляют влагу, выдерживая в сухожаровом шкафу при 100 град. С в течение 2 ч.
Заливается кал одним из приготовленных консервантов в объеме 1:1 или 1 часть фекалий и 2 части раствора консерванта, при этом тщательно перемешивается индивидуальной палочкой.
Хранить фекалии в растворах консервантов можно от нескольких месяцев до года, при более длительном хранении возможно разрушение яиц гельминтов.
6. Для консервации простейших кишечника фекалии можно поместить в консервант Турдыева: 80,0 мл 0,2%-ного раствора азотистокислого натрия (0,16 г NaNO2 + 80,0 мл воды дистиллированной) + 2,0 мл глицерина + 10 мл концентрированного формалина (аптечного) + 8,0 мл концентрированного раствора Люголя (см. п. 4.2.4.1.).
Смешивать в соотношении: 1 часть кала и 3 части консерванта.
7. Химические консерванты для консервации и хранения взрослых гельминтов или их фрагментов:
- формалин 10%-ный;
- спирт 70%-ный;
- жидкость Барбагалло;
- глицерин.
8. Для консервации мышц с личинками трихинелл используется концентрированный раствор хлористого натрия (на 100 мл воды 40-50 г NaCl).
2.1.2. Отбор соскобов с перианальных складок
- Соскоб с перианальных складок можно забирать у обследуемого в лаборатории, или заранее выдавать пробирки с ватными тампонами, смоченными в глицерине, на шпателях или флаконы с глазными палочками, покрытыми специальным клеевым слоем (п. 4.2.3.), предварительно проинструктировав обследуемого (если обследуется ребенок, то родителей ребенка) о способе забора материала и доставке его в лабораторию.
- Утром (вечером и утром обследуемому не подмываться) собрать соскоб с перианальных складок вокруг ануса методом "смыва" или "отпечатка" приготовленным ватным тампоном, смоченным в глицерине, или липкой лентой, или глазными стеклянными палочками со специальным клеевым слоем, как описано в п. 4.2.3.
- После забора соскоба шпатели вкладываются обратно в пробирку, липкая лента наклеивается на предметное стекло, а глазные палочки вкладываются в соответствующий флакон или специальный контейнер с штативами. Пробирки, флаконы, предметные стекла предварительно маркируются (при массовых "обследованиях маркируются цифрами согласно списку обследуемых).
2.2. Отбор дуоденального содержимого (желчь)
- Материал доставляется в лабораторию в чистых химических или центрифужных пробирках сразу после зондирования пациента натощак.
- Доставляют все три фракции (порции "А", "В", "С") и исследуют сразу после поступления в лабораторию.
- Порцию "А" доставляют для исследования на патогенные простейшие двенадцатиперстной кишки (лямблии), личинки стронгилоидеса, трихостронгилид, анкилостомид.
- Порции "В" и "С" доставляют для исследования на яйца гельминтов, паразитирующих в протоках печени и поджелудочной железы.
2.3. Отбор проб мокроты
- Доставляется в лабораторию мокрота, выделенная при откашливании (не слюна и не слизь с носоглотки), в стерильной посуде с крышками (можно в чашках Петри).
- Исследуется сразу после поступления.
2.4. Отбор проб мочи
- Доставляется в лабораторию моча утреннего сбора в чистых стеклянных банках с крышками.
- Исследуется сразу после поступления в лабораторию.
- На шистосомоз - доставляется моча, собранная между 10 ч утра и 14 ч дня, или все порции суточной мочи; желательно собрать мочу после физической нагрузки (например, 20-30 приседаний).
2.5. Отбор проб эпидермиса кожи
- С участков кожи (где изменения кожи или зуд) делают несколько срезов.
- Поверхностные срезы кожи диаметром 2-3 мм делают бескровно, с соблюдением асептики, стерильным лезвием бритвы или глазным скальпелем, предварительно приподняв кожу кончиком стерильной иглы.
- Помещают кусочки кожи в стерильную стеклянную посуду (можно чашки Петри) с физраствором.
- Исследуют сразу после забора материала.
2.6. Биопсия мышечной ткани
(поперечно - полосатой мускулатуры)
- Хирургическим путем получают биопсированные кусочки двуглавой или икроножной мышц (ближе к сухожилию).
- Помещают в стерильную стеклянную посуду с физраствором.
- Исследуют сразу после биопсии.
- Если лабораторное исследование откладывается на какой-то срок, пробы мышц помещают в консервант или замораживают. Консервантом может служить концентрированный раствор хлорида натрия (30-50%).
2.7. Отбор проб для контроля эффективности лечения
кишечных, печеночных гельминтозов и протозоозов
- После лечения геогельминтозов кишечника кал отбирается (п. 2.1.) через месяц после проведенного лечения, а после лечения протозоозов кишечника кал отбирается (п. 2.1. и 2.1.1.) в зависимости от выявленного заболевания: при амебиазе, балантидиазе - сразу после лечения, при лямблиозе - через неделю.
- После лечения контактных гельминтозов: при гименолепидозе кал отбирается (п. 2.1.) через 1 и 6 месяцев после лечения; при энтеробиозе перианальный соскоб отбирается (п. 2.1.2.) через 4-6 дней после лечения.
- После лечения биогельминтозов кал отбирается (п. 2.1. и 2.1.1.) через 3-4 месяца после проведенного курса лечения.
- При первом отрицательном результате (исследования фекалий), отбор проб проводится еще двукратно с интервалом 2-4 дня, после чего ставится окончательный результат лабораторного анализа.
- После лечения инвазий желчевыводящих путей контроль эффективности можно проводить как при исследовании кала, так и желчи, применяя соответствующие методы лабораторного исследования.
При стронгилоидозе контроль эффективности проводится только при исследовании желчи (даже, если паразит был обнаружен копроскопическими методами) через месяц после лечения.
3. ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ
Макро- и микроскопические паразитологические методы лабораторной диагностики являются прямыми методами обнаружения гельминтов, их фрагментов, яиц и личинок гельминтов; вегетативных и цистных форм патогенных простейших, при обнаружении и идентификации которых не требуются косвенные методы исследования.
Все микроскопические методы применяются по показаниям (см. описание в конце каждого метода и табл. 1).

При плановых и профилактических осмотрах детского контингента, а также при обследовании декретированных групп населения необходимо обследовать пациента одновременно методом перианального соскоба в сочетании с одним из копроовоскопических методов и методом нативного мазка с раствором Люголя.
При обследовании больного в направлении для лаборатории необходимо указать предварительный диагноз, что позволит лаборанту выбрать соответствующую методику для выявления или исключения данного вида возбудителя. При отсутствии в направлениях врачей четкого диагноза и затруднении в выборе эффективного метода лабораторного исследования на кишечные простейшие и гельминты больного лучше обследовать с применением "комплексного" метода исследования фекалий из консерванта или универсального метода формалин - эфирного (уксусно - эфирного) осаждения.
При
Приказ Комитета здравоохранения г. Москвы от 25.02.1999 n 85 'О внесении дополнений к приказу Департамента здравоохранения и Департамента фармации от 29.05.96 n 331/50 'Об организации обеспечения льготных категорий населения Москвы лекарственными средствами и изделиями медицинского назначения, отпускаемыми по рецептам врачей бесплатно или со скидкой'  »
Читайте также