ОРГАНИЗАЦИЯ РАБОТЫ ПРИ ИССЛЕДОВАНИЯХ МЕТОДОМ ПЦР МАТЕРИАЛА, ИНФИЦИРОВАННОГО ПАТОГЕННЫМИ БИОЛОГИЧЕСКИМИ АГЕНТАМИ iii - iv ГРУПП ПАТОГЕННОСТИ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУ 1.3.1888-04 (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 04.03.2004)


Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
4 марта 2004 года
Дата введения
с момента утверждения
1.3. ЭПИДЕМИОЛОГИЯ
ОРГАНИЗАЦИЯ РАБОТЫ ПРИ ИССЛЕДОВАНИЯХ
МЕТОДОМ ПЦР МАТЕРИАЛА, ИНФИЦИРОВАННОГО ПАТОГЕННЫМИ
БИОЛОГИЧЕСКИМИ АГЕНТАМИ III - IV ГРУПП ПАТОГЕННОСТИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУ 1.3.1888-04
1. Разработаны: Федеральным центром госсанэпиднадзора Минздрава России (Е.Н. Беляев, И.В. Брагина, С.Г. Домнин, М.В. Зароченцев, Э.Ф. Опочинский, Т.В. Воронцова), Центром по генной диагностике особо опасных инфекционных заболеваний Минздрава России на базе Российского научно-исследовательского противочумного института "Микроб" (А.Н. Куличенко, Н.А. Осина, И.Н. Шарова, М.Н. Ляпин, И.Г. Дроздов, В.В. Кутырев), Противочумным центром Минздрава России (В.Е. Безсмертный, С.М. Иванова, Ю.А. Панин), ООО "Биоком" (А.В. Сычев, А.Б. Комаров, Л.А. Сердобинский).
2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г. Онищенко 4 марта 2004 г.
3. С введением настоящих Методических указаний теряют силу "Методические рекомендации по проведению работ в диагностических лабораториях, использующих метод полимеразной цепной реакции. Основные положения", утвержденные заместителем Председателя Госкомсанэпиднадзора Г.Г. Онищенко 22.06.95.
1. Область применения
1.1. Настоящие Методические указания устанавливают требования к помещениям лабораторий и порядку проведения в них работ с патогенными биологическими агентами (ПБА) III - IV групп патогенности с использованием методов, основанных на полимеразной цепной реакции (ПЦР).
1.2. Методические указания регламентируют выполнение исследований методом ПЦР с применением оборудования и тест-систем, разрешенных к применению на территории Российской Федерации в установленном порядке.
1.3. Методические указания определяют принципы организации работы лабораторий, использующих метод полимеразной цепной реакции, на этапах выполнения ПЦР-анализа.
2. Нормативные ссылки
2.1. СП 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами". Минздрав России, 1999.
2.2. СП 1.2.1318-03 "Порядок выдачи санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний человека I - IV групп патогенности (опасности), генно-инженерно-модифицированными микроорганизмами, ядами биологического происхождения и гельминтами". Минздрав России, 2003.
2.3. СП 1.2.036-95 "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности". Госкомсанэпиднадзор России, 1995.
2.4. МУ 1.3.1794-03 "Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами I - II групп патогенности". Минздрав России, 2003.
2.5. МУ 3.5.5.1034-01 "Обеззараживание исследуемого материала, инфицированного бактериями I - IV групп патогенности при работе методом ПЦР". Минздрав России, 2001.
2.6. "Методические указания по применению бактерицидных ламп для обеззараживания воздуха и поверхностей в помещениях" N 11-16/03-06 от 28.02.95. Минздравмедпром России, 1995.
3. Общие положения
3.1. Полимеразная цепная реакция представляет собой процесс многократного увеличения числа копий (амплификация) фрагмента ДНК-мишени (кДНК), катализируемый in vitro термостабильной ДНК-полимеразой, и позволяет обнаружить специфичный участок генома биологического агента.
3.2. ПЦР обладает высокой чувствительностью, специфичностью,
обеспечивает возможность работы практически с любым видом
биологического материала и объектами окружающей среды, позволяет
выполнять анализ в течение 4 - 8 ч. Аналитическая чувствительность
тест-систем для выявления ДНК (РНК) микроорганизмов методом ПЦР
2 4
составляет 1 x 10 - 1 x 10 м.к. (геномэквивалент/мл),
специфичность - 85 - 100%.
3.3. По результатам анализа выдают предварительный ответ о наличии в пробе специфических участков (фрагментов) ДНК или РНК, имеющих гомологию с определенным участком генома возбудителя того или иного инфекционного заболевания, а также о наличии в исследуемом материале генетических маркеров или генетически модифицированных ДНК.
3.4. Проведение исследований методом ПЦР сопряжено с необходимостью обеспечения соблюдения правил биологической безопасности, а также определенных требований к организации и проведению анализа с целью предотвращения контаминации исследуемых проб нуклеиновыми кислотами и получения ложноположительных и ложноотрицательных результатов.
4. Требования к организации работы
с ПБА III - IV групп патогенности методом ПЦР
4.1. Общие требования
4.1.1. Работу с ПБА III - IV групп патогенности методом ПЦР проводят только при наличии в организации лицензии на деятельность, связанную с использованием возбудителей инфекционных заболеваний человека и санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения соответствующих работ в лаборатории, выданных в установленном порядке.
4.1.2. Организацию работ на этапах приема, разбора и первичной обработки материала, подготовки проб и выделения нуклеиновых кислот, а также обеззараживания проб проводят в соответствии с требованиями СП 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами". Работу на остальных этапах ПЦР-анализа проводят как с обеззараженным материалом.
4.1.3. В лабораториях, имеющих санитарно-эпидемиологическое заключение о возможности проведения работ с ПБА III группы патогенности, допускается проведение исследований методом ПЦР (без предварительного накопления возбудителя) с целью диагностики бруцеллеза, парентеральных вирусных гепатитов, ВИЧ-инфекции, возбудители которых относятся ко II группе патогенности.
4.2. Требования к помещениям ПЦР-лаборатории
4.2.1. Помещения ПЦР-лаборатории, проводящей работы с ПБА III - IV групп патогенности, должны соответствовать требованиям СП 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами".
4.2.2. Проведение исследований методом ПЦР с ПБА III - IV групп патогенности допускается на базе действующих микробиологических (бактериологических, вирусологических, иммунологических и др.) лабораторий при условии соблюдения требований СП 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами" и организации в лаборатории самостоятельных или выделенных в составе других функциональных помещений рабочих зон, соответствующих этапам ПЦР-анализа.
4.2.3. ПЦР-лаборатория должна включать следующий минимальный набор рабочих зон:
- приема, регистрации, разбора и первичной обработки материала;
- выделения НК;
- приготовления реакционных смесей и проведения ПЦР;
- детекции продуктов амплификации методом электрофореза или ГиФА.
4.2.4. В ПЦР-лабораториях необходимо также предусмотреть наличие вспомогательных помещений (комнаты ведения учетных документов или ординаторской (комнаты персонала) <*>; кабинета заведующего лабораторией <*>; раздевалки для сотрудников <**>; комнаты приема пищи <**>; туалета <**>; подсобных (складских) помещений <**>).
------------------------------------
<*> Помещения могут быть объединены.
<**> Помещения могут быть общими с другими подразделениями учреждения.
4.2.5. Необходимо наличие автоклавной комнаты для обеззараживания исследуемого материала. Она может быть общей с другими подразделениями учреждения при условии соблюдения требований биологической безопасности.
4.2.6. Помещения для выполнения работ на этапах ПЦР-анализа должны быть боксированными (боксы с предбоксами).
4.2.7. В зоне приема, регистрации, разбора и первичной обработки материала проводят прием ПБА, пробоподготовку (сортировку, маркировку, центрифугирование и др.), хранение и первичную инактивацию остатков биоматериала дезинфицирующими средствами. Зону приема, регистрации, разбора и первичной обработки материала располагают в комнате приема материала или в отдельном боксированном помещении. Здесь же можно проводить прием и обработку проб для исследования другими методами (бактериологическими, вирусологическими, иммунологическими и т.д.), при условии выделения отдельного оборудованного рабочего места для ПЦР-анализа.
4.2.8. Зону выделения нуклеиновых кислот размещают в отдельном помещении. При организации ПЦР-лаборатории на базе действующей микробиологической лаборатории допускается выделение НК в помещениях, в которых проводят другие виды исследований, кроме генно-инженерных работ и работ по накоплению ПБА. В этом случае в помещении организуют рабочую зону для выделения нуклеиновых кислот (НК), в которой располагают ПЦР-бокс или бокс биологической безопасности. В ПЦР-боксе (или боксе биологической безопасности) для выделения НК не допускается проведение других работ.
4.2.9. В зоне приготовления реакционных смесей и проведения ПЦР производят приготовление ПЦР-смеси, внесение в пробирку для ПЦР выделенных препаратов ДНК или кДНК, обратную транскрипцию РНК и амплификацию ДНК или кДНК. Помещение для приготовления реакционных смесей и проведения ПЦР должно быть отдельным. Приготовление реакционных ПЦР-смесей проводят в ПЦР-боксе.
4.2.10. При необходимости этап выделения НК может быть совмещен в одном помещении с этапом приготовления реакционных смесей и проведения ПЦР при наличии в нем отдельных ПЦР-боксов (боксов биологической безопасности) - для подготовки реакционных ПЦР-смесей и для выделения НК.
4.2.11. Зону детекции продуктов амплификации располагают в отдельном помещении, по возможности оснащенном ПЦР-боксом.
4.2.12. При необходимости одновременного использования для детекции продуктов амплификации метода электрофореза и метода гибридизационного анализа следует выделить в помещении детекции отдельную рабочую зону для проведения гибридизационного анализа. В этом случае оборудование и принадлежности для каждого вида детекции маркируют применительно к каждой зоне. Не допускается использовать для проведения гибридизационного анализа пипетки и посуду, предназначенные для электрофореза.
4.2.13. Планировочные решения и размещение оборудования должны обеспечивать поточность движения исследуемого материала. Следует полностью исключить воздухообмен между помещением детекции продуктов амплификации и другими помещениями.
4.2.14. Лабораторию оборудуют водопроводом, канализацией, электричеством и отоплением в соответствии с СП 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами". Все помещения лаборатории обеспечивают достаточным естественным и искусственным освещением.
4.2.15. При строительстве новых или реконструкции имеющихся ПЦР-лабораторий помещения оборудуют приточно-вытяжной или вытяжной вентиляцией. Разница в давлении воздуха в помещениях ПЦР-лаборатории достигается за счет различий в кратности воздухообмена в них. Кратность воздухообмена должна соответствовать значениям, приведенным в таблице.
---------------------------------------T-------------------------¬
¦ Наименование помещения ¦ Кратность воздухообмена ¦
¦ ¦ (куб. м/ч) ¦
¦ +-----------T-------------+
¦ ¦ приток ¦ вытяжка ¦
+--------------------------------------+-----------+-------------+
¦Зона приема, регистрации, разбора и ¦ 5 ¦ 6 ¦
¦первичной обработки материала ¦ ¦ ¦
+--------------------------------------+-----------+-------------+
¦Зона выделения нуклеиновых кислот (НК)¦ 5 ¦ 6 ¦
+--------------------------------------+-----------+-------------+
¦Зона приготовления реакционных смесей ¦ 5 ¦ 5 ¦
¦и проведения ПЦР ¦ ¦ ¦
+--------------------------------------+-----------+-------------+
¦Зона детекции продуктов амплификации ¦ 5 ¦ 7 ¦
L--------------------------------------+-----------+--------------
4.2.16. При необходимости в ПЦР-лаборатории могут быть установлены кондиционеры в соответствии с СП 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами".
4.2.17. Внутреннюю отделку помещений выполняют в соответствии с их функциональным назначением. Поверхности стен, пола и потолка в лабораторных помещениях должны быть гладкими, без щелей, легко обрабатываемыми, устойчивыми к действию моющих и дезинфицирующих средств. Полы не должны быть скользкими.
4.2.18. Лабораторная мебель должна иметь покрытие, устойчивое к действию моющих и дезинфицирующих средств. Поверхность столов не должна иметь трещин и швов.
4.2.19. Помещения на всех этапах ПЦР-анализа оборудуют бактерицидными лампами в соответствии с "Методическими указаниями по применению бактерицидных ламп для обеззараживания воздуха и поверхностей в помещениях" N 11-16/03-06 от 28.02.95. Бактерицидные лампы в помещениях ПЦР-лаборатории устанавливают из расчета 2,5 Вт/куб. м.
4.2.20. Помещения лаборатории должны быть непроницаемы для грызунов и насекомых.
4.2.21. ПЦР-лабораторию обеспечивают средствами пожаротушения.
4.3. Требования к лабораторному оборудованию
4.3.1. Комплект лабораторного оборудования определяют с учетом используемых наборов реагентов для выделения ПК, амплификации и детекции результатов исследований. Помещение для каждого этапа проведения ПЦР обеспечивают своим набором лабораторного оборудования (Прилож. 2).
4.3.2. Приборы, оборудование и средства измерения, используемые в работе лаборатории, должны быть технически исправны, иметь технический паспорт и рабочую инструкцию по эксплуатации. Средства измерения регулярно подвергают метрологическому контролю. Используемые приборы должны соответствовать нормам безопасности и электромагнитной совместимости.
4.3.3. Для проведения исследования используют приборы и расходные материалы (пробирки, наконечники к микродозаторам), исключающие возможность перекрестной контаминации исходного материала, выделенных НК и продуктов ПЦР. Для этого используют:
- термостаты с твердотельным термоблоком;
- пробирки с плотно закрывающимися крышками;
- одноразовые пробирки и наконечники к микродозаторам;
- наконечники, строго соответствующие автоматическим пипеткам, а пробирки

ОПРЕДЕЛЕНИЕ Конституционного Суда РФ от 04.03.2004 n 147-О ОБ ОТКАЗЕ В ПРИНЯТИИ К РАССМОТРЕНИЮ ЖАЛОБЫ ГРАЖДАНКИ ТИМОШЕНКО ГАЛИНЫ ВАСИЛЬЕВНЫ НА НАРУШЕНИЕ ЕЕ КОНСТИТУЦИОННЫХ ПРАВ ПОДПУНКТОМ 1 ПУНКТА 1 СТАТЬИ 162 НАЛОГОВОГО КОДЕКСА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ  »
Постановления и Указы »
Читайте также