ОРГАНИЗАЦИЯ РАБОТЫ ПРИ ИССЛЕДОВАНИЯХ МЕТОДОМ ПЦР МАТЕРИАЛА, ИНФИЦИРОВАННОГО МИКРООРГАНИЗМАМИ i - ii ГРУПП ПАТОГЕННОСТИ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУ 1.3.1794-03 (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 05.12.2003)


Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
5 декабря 2003 года
Дата введения -
с момента утверждения
1.3. ЭПИДЕМИОЛОГИЯ
ОРГАНИЗАЦИЯ РАБОТЫ ПРИ ИССЛЕДОВАНИЯХ МЕТОДОМ
ПЦР МАТЕРИАЛА, ИНФИЦИРОВАННОГО МИКРООРГАНИЗМАМИ
I - II ГРУПП ПАТОГЕННОСТИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУ 1.3.1794-03
1. Разработаны: Департаментом госсанэпиднадзора Минздрава России (М.П. Шевырева, Ю.М. Федоров); Центром по генной диагностике особо опасных инфекционных заболеваний Минздрава России на базе Российского научно-исследовательского противочумного института "Микроб" (В.В. Кутырев, А.Н. Куличенко, Н.А. Осина, И.Н. Шарова, М.Н. Ляпин, И.Г. Дроздов); Федеральным центром госсанэпиднадзора Минздрава России (Е.Н. Беляев, И.В. Брагина, А.А. Ясинский, Э.Ф. Опочинский, Т.В. Воронцова, М.В. Зароченцев); ЦНИИ эпидемиологии Минздрава России (В.И. Покровский, Н.А. Семина, Г.А. Шипулин, Е.Н. Родионова); Противочумным центром Минздрава России (В.Е. Безсмертный, С.М. Иванова, Ю.А. Панин); ГИСК им. Л.А. Тарасевича (Т.А. Бектимиров, Р.А. Волкова, М.С. Воробьева, Л.В. Саяпина); Ростовским-на-Дону научно-исследовательским противочумным институтом (И.Ю. Сучков, С.О. Водопьянов, Б.Н. Мишанькин); Ставропольским научно-исследовательским противочумным институтом (Е.И. Еременко, А.Ф. Брюханов, О.И. Цыганова); Иркутским научно-исследовательским противочумным институтом (С.В. Балахонов, М.Ю. Шестопалов); ГНЦ биотехнологии и вирусологии "Вектор" (Г.М. Игнатьев, Н.Л. Максимов, А.А. Неверов, В.А. Терновой, С.В. Нетесов); Биоком (А.Б. Комаров).
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Министерстве здравоохранения Российской Федерации (протокол N 20 от 2 декабря 2003 г.).
3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г. Онищенко 5 декабря 2003 г.
4. Введены впервые.
1. Область применения
1.1. Методические указания предназначены для органов и учреждений государственной санитарно-эпидемиологической службы, а также могут быть использованы юридическими лицами, независимо от организационно-правовых форм и форм собственности, и индивидуальными предпринимателями, выполняющими в установленном порядке работы с объектами и материалами, содержащими или подозрительными на содержание микроорганизмов I - II групп патогенности:
- диагностические (исследование объектов окружающей среды и клинического материала, в том числе от больных с подозрением на ТОРС);
- экспериментальные;
- производственные (работы по производству и контролю генодиагностических препаратов при условии соблюдения требований GMP).
1.2. Методические указания определяют принципы организации лабораторий и этапы выполнения ПЦР-анализа: взятие проб, первичная обработка, хранение, условия транспортирования, обеззараживание материала, выделение нуклеиновых кислот, проведение ПЦР (ОТ-ПЦР), учет и регистрация результатов при исследовании биологического материала, пищевых продуктов, материала из объектов окружающей среды.
1.3. Методические указания регламентируют выполнение исследований с использованием ПЦР-анализа, осуществляемого сертифицированными тест-системами и оборудованием и предусматривающего учет результатов методом электрофореза или гибридизационно-ферментного анализа (ГиФА).
2. Нормативные ссылки
2.1. Санитарно-эпидемиологические правила "Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности)" СП 1.3.1285-03.
2.2. Санитарно-эпидемиологические правила "Порядок выдачи санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний человека I - IV групп патогенности (опасности), генно-инженерно-модифицированными микроорганизмами, ядами биологического происхождения и гельминтами" СП 1.2.1318-03.
2.3. Санитарные правила и нормы "Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений" СанПиН 2.1.7.728-99.
2.4. Методические указания "Обеззараживание исследуемого материала, инфицированного бактериями I - IV групп патогенности, при работе методом ПЦР" МУ 3.5.5.1034-01. М., 2001.
2.5. "Методические указания по детекции патогенной микрофлоры в клиническом материале, пищевых продуктах, объектах внешней среды и генетической идентификации клеток с помощью полимеразной цепной реакции". Госкомсанэпиднадзор России, 18.10.96, N 01-19/123-17.
2.6. Методические указания "Лабораторная диагностика сибирской язвы у животных и людей, обнаружение возбудителя в сырье животного происхождения и объектах внешней среды". МЗ СССР, 01.09.86, и Госагропром СССР, 01.09.86.
2.7. Методические указания "Лабораторная диагностика холеры" МУ 4.2.1097-02. М., 2002.
2.8. Методические указания "Профилактика и лабораторная диагностика бруцеллеза у людей" МУ 3.1.7.1189-03. М., 2003.
2.9. Методические указания "Сбор, учет и подготовка к лабораторному исследованию кровососущих членистоногих - переносчиков возбудителей природно-очаговых инфекций" МУ 3.1.1027-01. М., 2002.
2.10. "Методические рекомендации по проведению работ в диагностических лабораториях, использующих метод полимеразной цепной реакции". М., 1995.
2.11. Временные методические рекомендации "Лабораторная диагностика "атипичной пневмонии" (SARS) методом ПЦР", утв. Минздравом России 03.05.03.
2.12. Руководство по профилактике чумы. Саратов: Слово, 1992.
2.13. Руководство "Использование ультрафиолетового излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей в помещениях" Р 3.1.683-98, МЗ РФ.
2.14. Инструкция по проектированию санитарно-эпидемиологических станций. СН 535-81. М.: Стройиздат, 1982.
3. Общие положения
3.1. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) основана на амплификации (многократном увеличении числа копий) фрагмента ДНК-мишени в условиях in vitro и позволяет обнаружить специфичный участок генома микроорганизма.
3.2. Аналитическая чувствительность тест-систем для выявления
2 4
ДНК (РНК) микроорганизмов методом ПЦР составляет 1 х 10 - 1 х 10
м.к. (геномных эквивалентов)/мл, специфичность - 85 - 100%,
возможно исследование любого биологического материала и объектов
окружающей среды, время выполнения анализа 4 - 8 ч.
3.3. Для выявления ДНК (РНК) микроорганизмов I - II групп патогенности ПЦР-анализ используют:
- в качестве экспрессного метода при исследовании материала от больного (подозрительного на заболевание) и индикации патогенных биологических агентов (ПБА) в объектах окружающей среды;
- как ускоренный предварительный тест при выполнении культурального и биологического методов исследования и для идентификации подозрительных культур;
- для определения эпидемиологической значимости изолятов на основании выявления генетических маркеров вирулентности, например ctxA- и tcpA-генов у возбудителя холеры;
- эпидемиологического мониторинга;
- в научных целях для генотипирования штаммов или их ретроспективного анализа.
4. Требования к организации работ
4.1. Проведение исследований по выявлению ДНК (РНК) микроорганизмов I - II групп патогенности сопряжено с необходимостью одновременного обеспечения правил биологической безопасности работ и требований к организации и проведению ПЦР-анализа с целью предотвращения контаминации исследуемых проб нуклеиновыми кислотами (НК).
4.2. Противоэпидемический режим работы при ее организации и выполнении должен быть обеспечен в соответствии с СП 1.3.1285-03 "Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности)", регламентирующими работу с микроорганизмами I - II групп патогенности.
4.3. Все этапы исследования материала, зараженного или подозрительного на зараженность вирусами I группы, проводят в условиях максимально изолированных лабораторий с использованием изолирующих средств индивидуальной защиты или в боксах биологической безопасности III класса в защитном костюме IV типа, дополненном резиновыми перчатками.
4.4. Исследования материала, инфицированного микроорганизмами I - II групп патогенности, методом ПЦР проводят в организациях, имеющих лицензию на деятельность, связанную с возбудителями инфекционных заболеваний человека, в лабораториях, имеющих санитарно-эпидемиологическое заключение о возможности проведения соответствующих работ (с указанием конкретных видов микроорганизмов). В этой же лаборатории могут проводиться ПЦР-исследования с микроорганизмами III - IV групп патогенности.
4.5. Допускается проведение исследований крови методом ПЦР на бруцеллез, парентеральные вирусные гепатиты, ВИЧ-инфекцию в лабораториях, имеющих санитарно-эпидемиологическое заключение о возможности проведения работ с возбудителями III группы патогенности, выданное в установленном порядке.
4.6. Передачу исследуемого материала в другие организации проводят в соответствии с п. п. 2.1.2 и 2.8.20 СП 1.3.1285-03 "Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности)".
4.7. Работу по ПЦР-диагностике организует специалист с высшим образованием, прошедший обучение на лицензированных курсах специализации (повышения квалификации) по работе с ПБА I - II групп патогенности и по ПЦР-диагностике.
5. Требования к помещению и оборудованию ПЦР-лабораторий
5.1. Помещения, в которых проводят исследования на наличие НК микроорганизмов I - II групп патогенности, размещают в "заразной" зоне лаборатории, проводящей диагностические и другие исследования с указанными микроорганизмами. При наличии возможности помещения располагают в виде отдельного блока. При строительстве новых или реконструкции имеющихся помещений лабораторию ПЦР размещают в отдельно стоящем здании (изолированной части здания) с соблюдением требований СП 1.3.1285-03 "Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности)" и учетом особенностей устройства вентиляционной системы ПЦР-лаборатории, изложенных в п. 5.19 настоящих Методических указаний.
5.2. Рабочая зона ПЦР-лаборатории в соответствии с этапами ПЦР-анализа должна включать следующий минимальный набор последовательно расположенных самостоятельных помещений (прилож. 1) <*> или отдельно выделенных рабочих зон (в составе других функциональных помещений):
- приема, разборки, первичной обработки материала;
- подготовки проб, выделения нуклеиновых кислот (НК);
- приготовления реакционных смесей, проведения ПЦР и обратной транскрипции (ОТ);
- учета результатов методом электрофореза или ГиФА.
------------------------------------
<*> Не приводится.
5.3. Комнату выделения НК располагают вблизи от комнаты приема материала, а помещение для учета результатов - по возможности в отдалении от других перечисленных помещений для обеспечения условий, исключающих занос в них продуктов амплификации (ампликонов) с воздушным потоком.
5.4. Не допускается выполнение ПЦР-исследований в помещениях для проведения работ с использованием культуральных (накопление патогенных биологических агентов) и генно-инженерных методов, в том числе связанных с получением (клонированием) и выделением рекомбинантных плазмид.
5.5. Зону приема, регистрации, сортировки, первичной обработки материала (объединение или разделение проб, центрифугирование, инактивацию и т.д.) располагают в комнате приема материала блока для работы с инфицированными животными или в отдельной боксированной комнате. В этих же помещениях может проводиться обработка проб к другим видам исследований (бактериологическое, вирусологическое, серологическое и т.д.). При наличии возможности в помещении устанавливают бокс биологической безопасности III класса защиты (допускается также использование бокса 2ШНЖ, например, фирмы "Изотоп" и др.) или бокс безопасности II класса защиты.
5.6. Зону по подготовке проб и выделению нуклеиновых кислот размещают в боксированном помещении (микробиологический бокс с предбоксом) или в комнате заражения и вскрытия животных. Работу проводят в боксе биологической безопасности II или III класса. В рабочей зоне располагают оборудование и предметы, необходимые только для предварительной обработки, выделения НК (примерный перечень представлен в Прилож. 2).
5.7. Зону приготовления реакционных смесей и проведения ОТ и ПЦР-амплификации располагают в боксированном помещении или боксе биологической безопасности II класса (или ПЦР-боксе) - для подготовки реакционных смесей для ОТ и ПЦР.
5.8. Работу по подготовке реакционных смесей для ПЦР и ОТ-ПЦР проводят до доставки в бокс проб, поступающих из зоны выделения НК. Смесь может быть приготовлена также за пределами помещений лаборатории, предназначенных для работы с заразным материалом, например в комнате (боксе) для розлива питательных сред.
5.9. При необходимости этап подготовки проб и выделения нуклеиновых кислот может выполняться в одной комнате с этапом ПЦР при наличии в ней бокса биологической безопасности II или III класса защиты для выделения НК и бокса биологической безопасности II класса (или ПЦР-бокса) - для подготовки реакционных смесей для ОТ и ПЦР. Каждый бокс рассматривается как соответствующая рабочая зона.
5.10. Зону детекции результатов располагают в боксированном помещении. При отсутствии боксированного помещения работу проводят в отдельной комнате, при возможности в ПЦР-боксе.
5.11. При одновременном использовании двух методов детекции продуктов амплификации - электрофоретического и ГиФА - следует выделить отдельные помещения или две рабочие зоны. Оборудование и принадлежности для каждого вида анализа маркируют применительно к каждой зоне. Обмен посудой и пипетками между зонами не допускается.
5.12. Помещения ПЦР-лаборатории покрывают кафелем (пол, стены) или масляной краской (стены, потолок), устойчивой к действию моющих и дезинфицирующих средств.
5.13. Во всех помещениях устанавливают бактерицидные лампы. Рекомендуется дополнительная установка переносного ультрафиолетового бактерицидного облучателя-рециркулятора.
5.14. Окна должны быть плотно закрыты. Для защиты рабочих столов от попадания прямого солнечного света используют светозащитные пленки из материала, устойчивого к дезинфицирующим средствам. Использование жалюзи не рекомендуется из-за адсорбции пыли.
5.15. Каждая рабочая зона должна иметь свой набор мебели, лабораторного оборудования, реагентов, автоматических пипеток, наконечников, пластиковой и стеклянной посуды, защитной одежды, обуви, резиновых перчаток, уборочного инвентаря и пр., используемых только в данной комнате

ПРИКАЗ МПР РФ от 05.12.2003 n 1083 ОБ УЧРЕЖДЕНИИ ЗНАКА ВЕТЕРАН ВОДНОГО ХОЗЯЙСТВА  »
Постановления и Указы »
Читайте также