ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА ИЗМЕРЕНИЯ ЭЛЕКТРИЧЕСКОГО СОПРОТИВЛЕНИЯ (ИМПЕДАНСА) ДЛЯ САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУК 4.2.1111-02 (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 26.02.2002)


Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
26 февраля 2002 года
Дата введения -
1 мая 2002 года
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ
И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА
ИЗМЕРЕНИЯ ЭЛЕКТРИЧЕСКОГО СОПРОТИВЛЕНИЯ (ИМПЕДАНСА)
ДЛЯ САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.2.1111-02
1. Разработаны Федеральным центром госсанэпиднадзора Минздрава России (Подунова Л.Г., Кривопалова Н.С., Сорокина Р.С.) при участии фирмы "SY-LAB", Австрия (М. Шинкингер, Соколов Д.М.).
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России (прот. N 12 от 14 февраля 2002 г.).
3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 26 февраля 2002 г., введены в действие с 1 мая 2002 г.
4. С момента ввода данных Методических указаний считаются утратившими силу "Методические рекомендации по проведению бактериологических исследований питьевой воды с использованием микробиологического экспресс-анализатора "Бак Трак 4100" N 01-19/82-23 от 22.05.96 и раздел 6 "Исследование питьевой воды" Методических указаний МУК 4.2.590-96 "Бактериологические исследования с использованием микробиологического экспресс-анализатора "Бак Трак 4100".
5. Введены впервые.
1. Область применения
1.1. Настоящие Методические указания предназначены для центров государственного санитарно-эпидемиологического надзора, осуществляющих контроль качества питьевой воды централизованных систем питьевого водоснабжения, а также для лабораторий организаций, предприятий и иных хозяйственных субъектов, обеспечивающих производственный контроль.
1.2. Методические указания устанавливают ускоренный метод качественного и количественного определения индикаторных микроорганизмов в питьевой воде в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.4.1074-01 "Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества".
1.3. Настоящие Методические указания разработаны для осуществления объективного, достоверного и быстрого санитарно-микробиологического анализа питьевой воды с целью контроля ее качества и для обеспечения безопасности и безвредности воды в централизованных системах питьевого водоснабжения.
2. Сущность метода
Методические указания содержат описание санитарно-микробиологического исследования питьевой воды по показателям качества СанПиН 2.1.4.1074-01 "Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества" с использованием микробиологического экспресс-анализатора "Бак Трак 4100" <*> производства австрийской фирмы "SY-LAB".
--------------------------------
<*> Далее - "Бак Трак".
Предлагаемый анализатор является автоматизированной системой, созданной на основе импедансной технологии и предназначенной для ускоренной количественной и качественной оценки степени микробного загрязнения исследуемой пробы.
Импеданс - это сопротивление потоку переменного тока через проводящий материал. Импедансная технология в микробиологии является непрямым культуральным методом для определения микроорганизмов с использованием измерения электрического сопротивления. Изменения импеданса происходят в питательной среде по мере того, как ее химический состав преобразуется в результате роста и метаболической активности микроорганизмов. Под действием микроорганизмов заряженные конечные продукты метаболизма выделяются в ростовую среду.
В основном незаряженные или слабозаряженные субстраты
превращаются в сильнозаряженные конечные продукты: белки
утилизируются до аминокислот, углеводы и жиры - до органических
кислот и т.д. Образующиеся метаболиты имеют меньший размер и,
таким образом, более подвижны. Эти электрохимические процессы
приводят к существенным изменениям импеданса. Когда количество
6 7
микроорганизмов достигает порога около 10 - 10 клеток/мл,
наблюдаются экспоненциальные изменения импедансного сигнала.
Время, необходимое для достижения значимого изменения импеданса,
называется временем определения импеданса (IDT). Значение IDT
обратно пропорционально начальной концентрации микроорганизмов в
исследуемой пробе. Ход кривых импедансного сигнала соответствует и
отражает кривую роста микроорганизмов в исследуемой пробе.
Селективные питательные среды, специально разработанные для измерения импеданса в системе "Бак Трак 4100", позволяют определять микробиологические показатели качества питьевой воды в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.4.1074-01 и сокращают сроки получения результатов.
3. Нормативные ссылки
3.1. Федеральный закон "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ.
3.2. "Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан" от 22.07.93 N 5487-1.
3.3. Санитарные правила и нормы "Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества". СанПиН 2.1.4.1074-01.
3.4. Методические указания "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды". МУК 4.2.1018-01.
3.5. Методические указания "Бактериологические исследования с использованием микробиологического экспресс-анализатора "Бак Трак 4100". МУК 4.2.590-96.
4. Проведение анализа
Исследование проводится по микробиологическим показателям качества питьевой воды, регламентированным СанПиН 2.1.4.1074-01 "Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества".
Определяемые показатели:
1. Общее число микроорганизмов в 1 мл.
2. Общие колиформные бактерии в 100 мл.
3. Термотолерантные колиформные бактерии в 100 мл.
4. Споры сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл.
5. Колифаги в 100 мл.
Отбор, хранение и транспортирование проб для исследования, а также подготовка их к анализу и методика работы при использовании мембранных фильтров проводятся в соответствии с требованиями МУК 4.2.1018-01 "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды".
4.1. Определение общего числа микроорганизмов
1. Питательная среда: BiMedia 001A, приготовленная в соответствии с требованиями инструкции изготовителя.
2. Протокол измерения.
2.1. Установить температуру 37 °C на приборе "Бак Трак".
2.2. Установить в основном меню программы прибора параметры.
Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters):
Время исследования (Duration) - 24 ч.
Масштаб измерений (Scale):
- М-параметр 0 - 50%;
- Е-параметр 0 - 50%.
Время задержки (Delay) - 1 ч.
3. Установка пороговых значений (Thresholds):
3.1. В случае использования калибровочного файла для исследования питьевой воды параметры пороговых значений вносятся автоматически (имеется коммерческий калибровочный файл для исследования питьевой воды - WATER.COR).
3.2. При отсутствии калибровочного файла одновременно с посевом исследуемого образца воды на среду BiMedia 001A производится определение общего количества бактерий классическим методом на чашках Петри в соответствии с требованиями МУК 4.2.1018-01 "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды".
Наименования рекомендуемых для использования в данном случае питательных сред приведены в разделе 6 данных Методических указаний.
Результаты, полученные при классическом методе исследования (KOE/CFU в 1 мл), вносят в соответствующий файл (MAIN MENU/DATA FUNCTION/ENTER VALUES). Основные этапы создания калибровочного файла рассмотрены в разделе 5 данных указаний.
4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды BiMedia 001A.
5. Внести 1 мл исследуемого образца воды в измерительную ячейку с 9 мл питательной среды.
6. Тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями (не переворачивать ячейку!).
7. Для контроля среды используют одну измерительную ячейку с 10 мл среды BiMedia 001A (без инокулята).
8. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (START MEASUREMENT) и начать измерение.
9. После того, как каждая позиция блока будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Бак Трак".
Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически.
При пересечении порогового значения происходит автоматический подсчет численности микроорганизмов в исследуемом образце воды.
Результат определения KOE (CFU) выдается автоматически в виде количества микроорганизмов в 1 мл исследуемого образца воды.
Учет результатов проводится по М-параметру.
4.2. Определение общих и термотолерантных
колиформных бактерий
Исследование может проводиться одним из трех методов:
1) мембранной фильтрации с последующим тестированием на микробиологическом экспресс-анализаторе "Бак Трак";
2) титрационным с предварительным этапом накопления бактерий в жидкой питательной среде;
3) прямого измерения с использованием измерительных ячеек прибора "Бак Трак" объемом 100 мл.
4.2.1. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий методом мембранной фильтрации (основной метод)
Сущность метода заключается в концентрировании бактерий из установленного объема анализируемой пробы воды и дальнейшем определении показателя на приборе "Бак Трак". Используется метод мембранных фильтров в соответствии с МУК 4.2.1018-01 "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды".
1. Среда BiMedia 160B <*>, приготовленная в соответствии с требованиями инструкции изготовителя.
--------------------------------
<*> Возможно использование питательной среды BiMedia 160C при необходимости определения индолообразования.
2. Протокол измерения.
2.1. Установить температуру 37 °C на приборе "Бак Трак".
2.2. Установить в основном меню программы прибора параметры.
Время исследования (Duration) - 24 ч.
Масштаб измерений (Scale):
- М-параметр 0 - 50%;
- Е-параметр 0 - 50%.
Время задержки (Delay) - 1 ч.
3. Установка пороговых значений (Thresholds):
3.1. В случае использования калибровочного файла для исследования питьевой воды параметры пороговых значений вносятся автоматически (имеется коммерческий калибровочный файл для исследования питьевой воды на колиформные бактерии - COLI.COR).
3.2. В отсутствии калибровочного файла одновременно с посевом исследуемого образца воды на среду BiMedia 160B производится определение наличия колиформных бактерий классическим методом мембранных фильтров в соответствии с МУК 4.2.1018-01.
Результаты, полученные при классическом методе исследования, вносят в соответствующий файл (MAIN MENU/DATA FUNCTION/ENTER VALUES). Основные этапы создания калибровочного файла рассмотрены в разделе 5 данных указаний.
4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 10 мл среды BiMedia 160B.
5. Поместить мембранный фильтр исследуемого образца воды в измерительную ячейку с 10 мл среды.
6. Для контроля среды используют измерительную ячейку с 10 мл среды BiMedia 160B.
7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (START MEASUREMENT) и начать измерение.
8. После того, как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Бак Трак".
Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически.
При наличии в исследуемом образце воды единичных клеток колиформных бактерий изменение сигнала импеданса превышает 5%-ное пороговое значение по М-параметру за период времени менее 16 часов.
При положительном результате наблюдается также изменение цвета питательной среды: исходный пурпурный цвет среды меняется на желтый.
При использовании калибровочного файла результат исследования выдается автоматически в виде количества колиформных бактерий в исследуемом объеме воды.
Для постановки оксидазного теста и определения ферментации лактозы при (44 +/- 0,5) °C с целью подтверждения наличия или отсутствия термотолерантных колиформных бактерий в исследуемой пробе из ячеек с признаками роста колиформных бактерий делают высев петлей на чашки Петри со средой Эндо. Посевы инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение 24 +/- 2 часов.
Постановка тестов проводится в соответствии с требованиями МУК 4.2.1018-01 "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды".
4.2.2. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий прямым методом с использованием измерительных ячеек объемом 100 мл
1. Концентрированная среда BiMedia 160B (5-кратной концентрации) <*>.
--------------------------------
<*> Для приготовления концентрированной среды навеска сухого препарата среды увеличивается в 5 раз, а объем дистиллированной воды остается прежним.
2. Протокол измерения.
2.1. Установить температуру 37 °C на приборе "Бак Трак".
2.2. Установить в основном меню программы прибора параметры.
Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters):
Время исследования (Duration) - 24 ч.
Масштаб измерений (Scale):
- М-параметр 0 - 50%;
- Е-параметр 0 - 50%.
Время задержки (Delay) - 1 ч.
3. Установка пороговых значений (Thresholds):
3.1. В случае использования калибровочного файла для исследования питьевой воды параметры пороговых значений вносятся автоматически (имеется коммерческий калибровочный файл для исследования питьевой воды на колиформные бактерии - COLI.COR).
3.2. В отсутствии калибровочного файла одновременно с посевом исследуемого образца воды на среду BiMedia 160B производится определение колиформных бактерий классическим методом мембранных фильтров в соответствии с МУК 4.2.1018-01 "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды".
Результаты, полученные при классическом методе исследования, вносят в соответствующий файл (MAIN MENU/DATA FUNCTIONS/ENTER VALUES). Основные этапы создания калибровочного файла рассмотрены в разделе 5 данных указаний.
4. Поместить 100 мл исследуемого

РЕШЕНИЕ Верховного Суда РФ от 26.02.2002 n ГКПИ2001-1660 <О ГРАЖДАНСКОМ ДЕЛЕ ПО ЗАЯВЛЕНИЮ ТАЛЕВЛИНА А.А. И МИРОНОВОЙ Н.И.>  »
Постановления и Указы »
Читайте также