ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА БИФИДОБАКТЕРИЙ В КИСЛОМОЛОЧНЫХ ПРОДУКТАХ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУК 4.2.999-00 (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 08.11.2000)


Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
8 ноября 2000 года
Дата введения -
8 февраля 2001 года
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА
БИФИДОБАКТЕРИЙ В КИСЛОМОЛОЧНЫХ ПРОДУКТАХ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.2.999-00
1. Методические указания разработаны: Институтом питания РАМН - М.Н. Волгарев (руководитель), В.А. Тутельян, И.Б. Куваева, С.А. Шевелева; АО "Партнер" - А.С. Зальцман, Н.А. Абрамов, А.О. Мурашова.
2. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г. Онищенко 8 ноября 2000 г.
3. Введены впервые.
1. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие Методические указания устанавливают методику проведения лабораторных исследований (испытаний) по определению количества бифидобактерий в кисломолочных продуктах.
1.2. Методические указания разработаны в соответствии с Федеральным законом "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения", Положением о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании, Положением о Государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации.
1.3. Методические указания предназначены для применения в лабораториях организаций, независимо от форм собственности (далее - организации), осуществляющих производственный контроль качества при разработке, постановке на производство и в процессе промышленного выпуска кисломолочных продуктов; в лабораториях учреждений Государственной санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации и санитарно-эпидемиологических служб федеральных органов исполнительной власти, а также в лабораториях других организаций, аккредитованных в установленном порядке на право проведения испытаний указанной продукции.
2. Нормативные ссылки
2.1. Федеральный закон "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" N 52-ФЗ от 30 марта 1999 г.
2.2. Закон РФ "О защите прав потребителей" от 07.02.92.
2.3. "Положение о Государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании", утвержденное Постановлением Правительства Российской Федерации N 554 от 24 июля 2000 г.
2.4. "Положение о государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации", утвержденное Постановлением Правительства Российской Федерации N 554 от 24 июля 2000 г.
2.5. ГОСТ 26668-85 "Продукты пищевые и вкусовые. Порядок отбора проб для микробиологических анализов".
2.6. ГОСТ 26809-86 "Молоко и молочные продукты. Отбор проб и подготовка к испытаниям".
2.7. ГОСТ 9225-84 "Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа".
3. Методы отбора проб
3.1. Отбор проб - по ГОСТу 26809-86 "Молоко и молочные продукты. Отбор проб и подготовка к испытанию", ГОСТу 9225-84 "Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа", ГОСТу 26668-85 "Продукты пищевые и вкусовые. Порядок отбора проб для микробиологических анализов".
3.2. Для анализа отбирают 3 единицы потребительской упаковки методом случайной выборки.
3.3. Посуду с пробой или пробу в потребительской таре снабжают этикеткой, на которой указывают:
- номер пробы;
- наименование продукта;
- номер и объем партии;
- дату и час отбора пробы;
- должность и подпись лица, отбиравшего пробу;
- обозначение действующей нормативной документации, по которой вырабатывался продукт.
3.4. Пробу, отправляемую в лабораторию вне данного предприятия, пломбируют или опечатывают и снабжают этикеткой, на которой указывают:
- номер пробы;
- наименование предприятия-изготовителя;
- наименование продукта;
- номер и объем партии;
- дату и час выработки продукта с момента окончания технологического процесса;
- дату и час отбора пробы;
- должность и подпись лица, отбиравшего пробу;
- объем необходимых анализов;
- обозначение действующей нормативной документации, по которой вырабатывался продукт;
- должность и подпись должностного лица предприятия, на котором осуществляется контроль продукта.
3.5. Микробиологические анализы продукта проводят не более чем через 4 часа с момента отбора проб.
3.6. Пробы должны храниться и транспортироваться до начала исследований при температуре продуктов не выше 6 °С, не допуская подмораживания.
3.7. При оценке количества бифидобактерий специалистами центра госсанэпиднадзора и других организаций, упомянутых в п. 1.3 настоящих Методических указаний, отбор проб производится в присутствии должностного лица предприятия, на котором осуществляется контроль продукта.
4. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда и реактивы
4.1. Средства измерения
Весы лабораторные общего назначения, ГОСТ 24104-80Е
2-го и 4-го класса точности с
наибольшим пределом взвешивания 200 г
(или получаемые по импорту)
Иономер универсальный ЭВ-74 или ГОСТ 9245-79
потенциометр рН-340
Колбы исполнения 2, 2-го класса ГОСТ 1770-74Е
точности, номинальной вместимостью 50,
100, 200, 500, 1000 (куб. см)
Микроскоп биологический МБИ-1, МБИ-2, ГОСТ 8284-78
МБИ-3, МБР-1, МБР-3 (или полученный по
импорту с иммерсионной системой)
Пипетки исполнения 5, 1, 2-го классов ГОСТ 29227-91
точности, вместимостью 1 куб. см
Термометр (ртутный) с диапазоном ГОСТ 13646-68
измерения от 0 до 100 °С, с ценой
деления шкалы 1 °С
Термометр жидкостный (нертутный) с ГОСТ 28498-90
диапазоном измерения от 0 до 100 °С, с
ценой деления шкалы 1 °С
Цилиндры исполнения 1, вместимостью ГОСТ 1770-74Е
100, 500 (куб. см)
Часы механические сигнальные ГОСТ 3145-84
Часы песочные настольные на 1,5 и 10
мин.
4.2. Вспомогательное оборудование
Аппарат универсальный типа АВУ-6С для ТУ 64-1-2451-78
встряхивания жидкости в колбах и
пробирках (шуттель-аппарат)
Баня водяная ТУ 46-22-608-75
Микрокалькулятор типа "Электроника ГОСТ 27201-87
БЭ-0914М", "БЭ-14", "БЭ-21" или др.
типов
Ножницы медицинские ГОСТ 21239-89
Облучатель бактерицидный настенный ТУ 16-535-84
ОБН-150 или других видов
Осветители к микроскопу типа ОИ-7,
ОИ-9, ОИ-18, ОИ-19 или других марок
Пинцет медицинский ГОСТ 21241-89
Скальпель хирургический, 15 см ГОСТ 21240-89
Стерилизаторы паровые медицинские или ГОСТ 19569-89
аналогичные
Стерилизаторы медицинские паровые и ГОСТ 27437-87
воздушные
Термостат, позволяющий поддерживать ТУ 64-1-1382-72
температуру (15 - 65) °С с отклонением
от заданной 1 °С
Холодильник бытовой электрический ГОСТ 16317-87
Шкаф сушильный стерилизационный ТУ 64-1-9009-74
ШСС-80 П или др. видов, позволяющий
поддерживать температуру (160 +/- 5) °С
Шпатели металлические или фарфоровые
15 - 20 см
Штативы металлические, пластмассовые
или деревянные
Электроплитка ГОСТ 14919-83
4.3. Лабораторная посуда и материалы
Бумага фильтровальная лабораторная ГОСТ 12026-76
Бутылки стеклянные для химических ГОСТ 15844-92
реактивов
Вата медицинская гигроскопическая ГОСТ 5556-81
Воронки стеклянные ГОСТ 25336-82
Карандаш по стеклу
Кастрюли эмалированные ГОСТ 24778-81
Марля медицинская ГОСТ 9412-77
Палочки стеклянные
Пергамент ГОСТ 1341-84
Петли бактериологические
Пробирки типов П1, П2, диаметром 16 мм, ГОСТ 25336-82
высотой 150 мм и диаметром 21 мм, 200 мм
Спиртовки лабораторные стеклянные ГОСТ 23932-90
Стаканы типа ВН, вместимостью 100 и ГОСТ 19908-90
200 (куб. см)
Стекла предметные для микропрепаратов ГОСТ 6672-75
Сумки-холодильники
Чашки биологические (Петри) ГОСТ 23932-90
Шпагат ГОСТ 16266-70
4.4. Реактивы, питательные среды
Агар микробиологический ГОСТ 17206-84
Бромтимоловый синий ТУ 6-09-20-86-77
Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72
Вода питьевая ГОСТ 51232-98
Глюкоза, ч. ГОСТ 6038-79
D-лактоза, 1-водная ТУ 6-09-22-98-79
Калий двухромовокислый (бихромат калия) ГОСТ 4220-75
Калия гидроксид (гидроокись) ГОСТ 4328-77
Калий фосфорно-кислый двузамещенный ГОСТ 2493-75
3-водный
Кислота аскорбиновая Государственная
Фармакопея, издание X,
стр. 43
Кислота молочная пищевая ГОСТ 490-79
Кислота серная, ч. ГОСТ 4204-77
Кислота соляная, х.ч. ГОСТ 3118-77
L-цистин соляно-кислый или цистин ТУ 6-093252-80
соляно-кислый, получаемый по импорту
Магний серно-кислый, 7-водный ГОСТ 4165-78
Метиленовый голубой, индикатор,
получаемый по импорту
Натрия гидрокарбонат ГОСТ 4201-79
Натрия гидроокись, ч.д.а. (натрий ГОСТ 4328-77
гидроксид)
Натрий лимонно-кислый трехзамещенный ГОСТ 22280-87
Натрий хлористый (натрий хлорид), ч., ГОСТ 4233-77
или х.ч., или ч.д.а.
Пептон сухой ферментативный для ГОСТ 13805-76
бактериологических целей
Печеночный отвар
Спирт этиловый ректификованный ГОСТ 18300-87
технический
Среда кукурузно-лактозная (ГМК-1) для ТУ 10-02-02-789-176-94
количественного учета бифидобактерий
Экстракт кукурузы сгущенный ТУ 10-04.08.14-88
Эфир для наркоза peг. N 64/228/321
5. Подготовка к анализу
5.1. Подготовка проб к анализу
5.1.1. Перед вскрытием поверхность упаковки продукта обмывается, протирается, чтобы удалить грязь, которая может загрязнить продукт. Затем поверхность упаковки протирается 70%-ным этиловым спиртом. Вскрытие упаковки производится в асептических условиях.
5.1.2. Продукт в вскрытых упаковках тщательно перемешивается.
5.1.3. Каждую отобранную пробу (упаковку) анализируют отдельно.
5.1.4. Из каждой упаковки после тщательного перемешивания пипеткой отбирается 10 куб. см кисломолочного продукта, помещается в стерильную посуду и затем нейтрализуется. Для этого на 10 куб. см исследуемого продукта в стерильную посуду добавляется 1,0 куб. см стерильного раствора натрия гидрокарбоната с массовой концентрацией 100 г/куб. дм; содержимое перемешивается с использованием стерильных приспособлений или шуттель-аппарата.
5.1.5. К нейтрализованному образцу продукта добавляется
физиологический раствор до достижения общего объема пробы 100 куб.
см, после чего смесь опять тщательно перемешивают. Таким образом
-1
получают первое разведение продукта (1 x 10 ). Пипетку промывают
до 10 раз полученной смесью до верхнего уровня имеющихся на ней
делений.
5.1.6. Последующие десятикратные разведения продукта готовят,
добавляя в 9 куб. см физиологического раствора по 1 куб. см
предыдущего разведения продукта. При этом смесь каждый раз
тщательно перемешивают. Таким образом, в седьмой пробирке продукт
8
будет разведен в 10 раз. Для приготовления каждого разведения
берут новую стерильную пипетку.
5.2. Подготовка посуды и материалов
5.2.1. Всю новую посуду, предназначенную для контроля количества бифидобактерий, кипятят в подкисленной воде (раствор соляной кислоты с объемной долей 1 - 2%) в течение (15 +/- 5) мин. и затем ополаскивают дистиллированной водой.
Посуду, бывшую в употреблении, моют 0,5%-ным щелочным раствором с помощью ершей и щеток и ополаскивают водопроводной водой. Сильно загрязненную посуду со следами жира, красок и иммерсионного масла опускают на 2 часа в хромовую смесь, подогретую до 40 - 45 °С, затем тщательно промывают проточной водопроводной водой.
Вымытую посуду не вытирают, а сушат при комнатной температуре или горячим воздухом.
Предметные стекла после мойки и ополаскивания вытирают чистой салфеткой или помещают в склянку с притертой пробкой в смесь этилового спирта и наркозного эфира в соотношении 1:1.
5.2.2. Лабораторную посуду перед использованием обязательно стерилизуют. Стерилизацию осуществляют сухим жаром в сушильном шкафу при (160 +/- 5) °С в течение 2 ч или паром в стерилизаторе при 1 атм. (121 +/- 1) °С в течение (30 +/- 1) мин. с последующим подсушиванием в сушильном шкафу. Перевод давления, показываемого монометром стерилизатора, в значение температуры проводится следующим образом:
0,5 атм. - 112 °С
0,7 атм. - 116 °С
0,8 атм. - 118 °С
1,0 атм. - 121 °С
2,0 атм. - 134 °С.
Пробирки, флаконы, бутылки, колбы закрывают ватно-марлевыми пробками. Поверх пробки (кроме пробирок) надевают бумажный колпачок, который обвязывают вокруг горлышка ниткой или закрепляют резиновым колечком.
Каучуковые, корковые и стеклянные пробки стерилизуют отдельно завернутыми в бумагу.
Стерильную посуду хранят в плотно закрывающихся шкафах или ящиках с крышками. Срок хранения стерильной посуды - не более 30 суток при ненарушенной завертке или невскрытых пеналах.
6. Приготовление питательных сред и реактивов
6.1. Изотонический (физиологический) 0,85%-ный раствор хлористого натрия
Для приготовления изотонического раствора активной кислотностью (7,0 +/- 0,1) ед. рН используют дистиллированную воду, рН которой проверяют индикатором бромтимоловый синий. При его добавлении цвет воды должен быть бутылочно-зеленым. В иных случаях воду не используют.
В 1,0 куб. дм воды растворяют

ПИСЬМО Минздрава РФ от 08.11.2000 n 293-22/144 <ОБ АККРЕДИТАЦИИ ФГУ ЦЕНТР СЕРТИФИКАЦИИ МИНЗДРАВА РОССИИ>  »
Постановления и Указы »
Читайте также