МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ, ПОЛУЧЕННОЙ ИЗ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУК 2.3.2.970-00 (утв. Минздравом РФ 24.04.2000)


Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
24 апреля 2000 года
Дата введения -
1 июля 2000 года
2.3.2. ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ И ПИЩЕВЫЕ ДОБАВКИ
МЕДИКО - БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ,
ПОЛУЧЕННОЙ ИЗ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ
ИСТОЧНИКОВ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 2.3.2.970-00
1. Разработаны Институтом питания РАМН (Тутельян В.А. - руководитель, Аксюк И.Н., Васильев А.В., Воробьева Л.Ш., Высоцкий В.Г., Волгарев М.Н., Королев А.А., Кравченко Л.В., Маганова Н.Б., Мазо В.К., Покровская Г.Р., Сокольников А.А., Сорокина Е.Ю., Тышко Н.В.); Институтом вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН (Семенов Б.Ф., Брицина М.В., Захарова Н.С.); Министерством здравоохранения РФ (Департамент госсанэпиднадзора) (Онищенко Г.Г., Петухов А.И.); Московской медицинской академией им. И.М. Сеченова Минздрава России (Бочков Н.П., Суханов Б.П.); Центром "Биоинженерия" РАН (Скрябин К.Г., Кузнецов Б.Б., Дорохов Д.Б., Асадова Ю.Е.); Медико - генетическим центром РАМН (Шишкин С.С.); Московским государственным университетом прикладной биотехнологии Министерства общего и профессионального образования Российской Федерации (Рогов И.А., Кроха Н.Г., Гурова Н.В., Сучков В.В.).
2. Утверждены 20 апреля 2000 г., введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 1 июля 2000 г.
3. Введены впервые.
1. Общие положения и область применения
1.1. Методические указания устанавливают требования к проведению медико - биологических исследований пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников.
1.2. Методические указания предназначены для учреждений санитарно - эпидемиологической службы Российской Федерации, осуществляющих государственный санитарно - эпидемиологический надзор, а также для других учреждений, аккредитованных на проведение работ в этой области.
1.3. Требования, изложенные в настоящих Методических указаниях в отношении продукции, полученной из генетически модифицированных источников, применяются на этапах постановки на производство, гигиенической экспертизы, государственной регистрации, закупки, ввоза в страну и реализации.
1.4. Методические указания разработаны с целью обеспечения единого, научно - обоснованного подхода к оценке качества и безопасности пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников, на этапах разработки, экспертизы и государственной регистрации этой продукции.
1.5. Производитель новой пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников, предназначенной для реализации на территории Российской Федерации, должен выпускать ее маркированной в соответствии с установленным порядком.
2. Нормативные ссылки
2.1. Федеральный закон "О санитарно - эпидемиологическом благополучии населения" от 30 марта 1999 г.
2.2. "Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан" от 22 июля 1993 г.
2.3. Федеральный закон "О внесении изменений и дополнений в Закон Российской Федерации "О защите прав потребителей" и Кодекс РСФСР об административных правонарушениях" от 9 января 1996 г.
2.4. Положение о государственном санитарно - эпидемиологическом нормировании, утвержденное Постановлением Правительства Российской Федерации от 5 июня 1994 г. N 625.
2.5. Положение о Государственной санитарно - эпидемиологической службе Российской Федерации, утвержденное Постановлением Правительства Российской Федерации от 30 июля 1998 г. N 680.
В официальном тексте документа, видимо, допущена опечатка: Постановление Правительства РФ издано 30.06.1998, а не 30.07.1998. 2.6. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации N 7 от 6 апреля 1999 г. "О порядке гигиенической оценки и регистрации пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников".
3. Термины и определения
Пищевая продукция - продовольственное сырье, пищевые продукты и их компоненты.
Продовольственное сырье - объекты биологического, органического и неорганического происхождения, используемые для производства пищевых продуктов.
Пищевой продукт - продукт животного, растительного, минерального или биосинтетического происхождения, предназначенный для употребления в пищу человеком, как в натуральном, так и в переработанном виде.
Компонент - вещество животного, растительного, микробного или минерального происхождения, а также природные или синтезированные пищевые добавки, используемые при подготовке или производстве пищевого продукта или присутствующие в готовом продукте в исходном или измененном виде.
Качество пищевой продукции - совокупность характеристик, которые обуславливают потребительские свойства, качество и безопасность пищевой продукции.
Безопасность пищевой продукции - отсутствие опасности для жизни и здоровья людей нынешнего и будущих поколений.
Генная инженерия - раздел молекулярной генетики, связанный с целенаправленным созданием in vitro новых комбинаций генетического материала (рекомбинантной ДНК), способного к воспроизводству и функционированию в клетке - хозяине.
Генетически модифицированный организм - организм или несколько организмов, любые неклеточные, одноклеточные или многоклеточные образования, способные к воспроизводству или передаче наследственного генетического материала, отличные от природных организмов, полученные с применением методов генной инженерии и содержащие генно - инженерный материал, в т.ч. гены, их фрагменты, или комбинацию генов.
4. Порядок гигиенической экспертизы
и государственной регистрации пищевой продукции,
полученной из генетически модифицированных
источников
4.1. Вся пищевая продукция, полученная из генетически модифицированных источников, проходит гигиеническую экспертизу в установленном порядке.
4.2. Проведение гигиенической экспертизы и государственной регистрации пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников, осуществляется в соответствии с порядком, установленным Постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации N 7 от 06.04.99 "О порядке гигиенической оценки и регистрации пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников".
4.3. Организация, фирма представляют в центр санитарно - эпидемиологического нормирования, гигиенической сертификации и экспертизы Министерства здравоохранения Российской Федерации комплект документов и материалов, включающий:
- заявку (письмо) на проведение гигиенической оценки и государственной регистрации пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников;
- материалы, отражающие медико - генетическую оценку пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников;
- материалы, отражающие технологические свойства пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников;
- материалы, отражающие медико - биологическую оценку пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников.
4.4. Объем и программа проведения работ по оценке качества и безопасности пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников, определяется по результатам экспертизы представленных материалов.
4.5. Для проведения работ по оценке качества и безопасности пищевых продуктов, полученных из генетически модифицированных источников, фирма - изготовитель поставляет образцы продукции, в количестве, необходимом для проведения полного объема исследований.
4.6. На основании экспертизы представленных документов и материалов и результатов проведенных медико - генетических, технологических и медико - биологических исследований продукции центр санитарно - эпидемиологического нормирования, гигиенической сертификации и экспертизы Минздрава России оформляет бланк регистрационного удостоверения (или мотивированное заключение об отказе) и передает его на подпись в Департамент госсанэпиднадзора Минздрава России. Регистрационное удостоверение подписывается Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, а в его отсутствие - начальником Департамента госсанэпиднадзора, заместителем Главного государственного санитарного врача Российской Федерации.
5. Медико - генетическая оценка пищевой продукции,
полученной из генетически модифицированных
источников
Необходимость проведения тех или иных исследований по данному разделу и для каждого конкретного вида пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников, определяется экспертом центра "Биоинженерия" РАН. Методы, описанные в пунктах 5.1 - 5.3, являются обязательными при проведении медико - генетической оценки пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников; методы, представленные в пункте 5.4, могут рекомендоваться как дополнительные.
5.1. Rapd анализ генотипов
Необходимое оборудование и реактивы
Оборудование и принадлежности
Микроцентрифужные пробирки типа Eppendorf на 1,5 и 0,5 мл (свободные от ДНК-аз и РНК-аз фирма Alpha)
Тефлоновый пестик и/или стеклянная палочка под размер микроцентрифужной пробирки на 1,5 мл <*>
Настольная микроцентрифуга типа Eppendorf (ТЭТА-20, 200000 об./мин.) <*>
Автоматические микропипетки переменного объема (классик / студент 0,5 - 10 мкл; 5 - 40 мкл; 200 - 10000 мкл)
Наконечники для микропипеток (наконечники "микро" и обычные)
Холодильник (охладитель проб) <*>
Плавающий штатив - "плотик" для микроцентрифужных пробирок
Весы до 0,5 кг
Микроанклав - "скороварка"
Бидистиллятор
ДНК-амплификатор ("Ампли-4")
Электрофоретическое оборудование для разделения фрагментов ДНК в агарозном геле: источник напряжения для электрофореза (НИП 300) <*> и прибор для горизонтального мини - электрофореза (мини - камера) <*>
УФ осветитель для визуализации результатов электрофореза ДНК (трансиллюминатор - UVT) <*>
Зеркальная фотокамера типа "Зенит" с оранжевым светофильтром
Фотопленка типа "Микрат-200"
Термостат ("Темо 24-15")
Шейкер (3D)
Микровстряхиватель пробирок типа Vortex (ТЭТА-2 или 4) <*>
РН-метр
Фитотрон для выращивания растений (Фитотрон-99)
Настольный ламинарный бокс (ЛБ-1)
--------------------------------
<*> Обозначение продукции, которая изготавливается на ООО "Biokom", Москва, Россия.
Необходимые реактивы и растворы
Реактивы
Трис (hydroxymethyl) aminometane
HCl конц.
ЭДТА
NaCl
SDS
Ацетат калия
Этиловый спирт 96%
Агароза для электрофореза
Бромистый этидий
Борная кислота
Бромфеноловый синий
Глицерин
Набор для амплификации ДНК
(Biomaster - S.r.l. - Italy - Russia, Москва)
Приготовление основных растворов
1 М Трис pH-7,5. Растворить 121,1 г Трис в 800 мл воды. Довести pH до необходимого значения добавлением концентрированной HCl и довести объем до 1 л. Раствор простерилизовать.
0,5 М ЭДТА pH-8,0. К 186,1 г ЭДТА добавить 800 мл воды. Довести pH до 8,0 NaOH.
5 М NaCl (х.ч. или ч.д.а.). 29,22 г NaCl растворить в 80 мл воды и довести объем до 100 мл, простерилизовать.
10-процентный SDS. 10 г SDS растворить в 90 мл воды, чтобы ускорить растворение, можно нагреть раствор до 60 град. C. Довести pH до 7,2 добавлением нескольких капель концентрированной HCl и довести до 100 мл. Внимание! При взвешивании SDS наденьте на лицо маску, т.к. при попадании на слизистую оболочку носоглотки этот летучий порошок вызывает сильное раздражение.
Экстракционный буфер (200 мМ Трис-HCl pH-7,5, 250 мМ NaCl, 25 мМ ЭДТА, 0,5-процентный SDS). Для приготовления 100 мл экстракционного буфера необходимо: 20 мл 1 М Трис-HCl (pH-7,5), 5 мл М NaCl, 5 мл 0,5 М ЭДТА, 5 мл 10-процентного SDS. Довести водой объем раствора до 100 мл.
5 М Ацетат калия. 49,1 г ацетата калия растворить в 80 мл воды и довести объем до 100 мл.
70-процентный этанол. Для приготовления 100 мл раствора требуется 73 мл 96% этанола и 27 мл воды.
ТВЕ 5Х буфер (0,089 М Трис - основание, 0,089 М борная кислота, 0,002 М ЭДТА pH-8,0). На 1 л раствора требуется: 54 г Трис, 27,5 г борной кислоты (ч.д.а.), 4,6 г Na2EDTAx2H20. Для приготовления электродного буфера ТВЕ-0,5X необходимо стоковый буфер разбавить в 10 раз дистиллированной водой.
Буфер для нанесения образца-6X (0,25-процентный бромфеноловый синий, 30-процентный глицерин, 10 мМ Трис-HCl, 1 мМ ЭДТА). Для приготовления 10 г буфера для нанесения требуется: 2,5 мг бромфенолового синего, 3 г глицерина, 0,1 мл Трис, 0,02 мл 0,5 М ЭДТА pH-8,0.
Раствор бромистого этидия (10 мг/мл). Растворить 1 г бромистого этидия в 100 мл воды. Для визуализации ДНК в агарозном геле используется раствор в концентрации 5 мкг/мл. Внимание! Все манипуляции с бромистым этидием и его растворами проводить в перчатках.
Выделение ДНК из растительной ткани
Для получения растительной ткани семена, клубни или другой растительный материал проращивают в контролируемых условиях до получения листьев или свежей растительной ткани.
Высечку листа, полученную при закрытии крышки пробирки типа Eppendorf объемом 1,5 мл или 10 - 14 мг ткани (когда высечку получить сложно), интенсивно гомогенизируют в 400 мл экстракционного буфера (необходимые растворы и реактивы) с помощью тефлонового пестика.
Примечание. Для выделения ДНК лучше брать молодые листья с мягкими тканями, без видимых следов поражения. Тефлоновый пестик должен плотно прилегать к стенкам пробирки. Стараться максимально минимизировать время гомогенизации. Гомогенизацию вести до интенсивного окрашивания в зеленый цвет экстракционного буфера.
Пробирки с гомогенатом встряхивать 5 сек. на Vortex.
Поместить пробирки в ультратермостат и инкубировать при 65 град. C 15 мин., периодически перемешивая содержимое пробирки мягким покачиванием.
Добавить в пробирки по 200 мкл 5 М ацетата калия (предварительно охлажденного в холодильнике) и тщательно перемешать содержимое пробирок легким встряхиванием.
Инкубировать пробы на ледяной бане 15 мин.
Центрифугировать пробы в настольной центрифуге при 16000 g 20 мин. при комнатной температуре.
Осторожно отобрать 400 мкл супернатанта в чистые пробирки и осадить двумя объемами 96-процентного этанола (охлажденного), осторожно перемешивая. На этом этапе можно наблюдать образование маленькой "медузы" или мелко дисперсной взвеси. Оставить пробирки на столе на 5 мин.
Центрифугировать пробы в настольной центрифуге при 16000 g 10 мин. при комнатной температуре.
Осадок ДНК промыть охлажденным при -20 град. C 70-процентным этанолом и центрифугировать, как это указано в предыдущем пункте. Рекомендуем

<ПИСЬМО> МНС РФ от 24.04.2000 n ФС-8-03/1838 <О ПОРЯДКЕ ЗАЧИСЛЕНИЯ НАЛОГОВ И СБОРОВ, ПОСТУПАЮЩИХ В ФЕДЕРАЛЬНЫЙ И ТЕРРИТОРИАЛЬНЫЕ ДОРОЖНЫЕ ФОНДЫ>  »
Постановления и Указы »
Читайте также