Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 18.02.2008 № 13

     - определение  патогенных  свойств  ГММ,  штамма-реципиента  и
референтного  (контрольного)  штамма  (адгезивность,  инвазивность,
вирулентность) in vitro и in vivo.
     Пищевые продукты,    в    которых    ГММ    (МГМА)   полностью
инактивированы  или  от  которых  они  освобождаются   в   процессе
изготовления,     подвергают    микробиологической    оценке    для
подтверждения отсутствия живых  клеток  технологической  микрофлоры
или штамма-продуцента в массе (объеме) продукта, установленной НТД,
но не менее чем в 1 г.
     5.10.10. Микробиологическая оценка проводится в соответствии с
утвержденными нормативными и методическими документами.
     5.10.11. Молекулярно-генетическая  оценка  пищевых  продуктов,
полученных из / или  с  использованием  ГММ  (МГМА);  ГММ  и  МГМА,
выделенных  из  пищевых  продуктов,  проводится  в  соответствии  с
утвержденными  методическими  документами   и   включает   в   себя
следующее:
     5.10.11.1. Выявление маркерных генов методом ПЦР.  В  качестве
маркерных  генов  для каждой группы микроорганизмов (молочнокислые,
дрожжи,  грибы,  бациллы и пр.) должны быть выбраны наиболее  часто
используемые        при        конструировании       ГММ       гены
антибиотикорезистентности;      векторные       последовательности,
селективные   маркеры,   последовательности   "ori",   ауксотрофные
последовательности.
     5.10.11.2. Подтверждение   родовой  и  видовой  принадлежности
методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) по генам 16S  рРНК,  а  в
случае  необходимости  -  штаммовой  принадлежности методом ДНК-ДНК
гибридизации.
     5.10.11.3. Идентификация    конкретных   целевых   генов   ГММ
проводится:    в    случаях,     если     известна     нуклеотидная
последовательность  целевого  гена и его регуляторных элементов,  -
посредством  ПЦР  с  соответствующими  праймерами   и   последующим
секвенированием,   рестрикционным   или  гибридизационным  анализом
ампликона; в случаях, если сведения о нуклеотидном составе целевого
гена   отсутствуют,   лабораторные   исследования   для  целей  его
идентификации  проводятся  в  аккредитованном  научном   центре   в
соответствии с утвержденными методическими документами.
     5.10.11.4. Идентификация продуктов экспрессии  целевого  гена,
которая проводится посредством:
     - определения иРНК,  транскрибируемых с целевого гена, методом
обратной транскрипции - полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР);
     - определения белка,  экспрессируемого целевым  геном  ГММ,  -
методом  электрофоретического  разделения  в  полиакриламидном геле
(ПААГ - ДСН);
     - определения  специфичности  белка,  экспрессируемого целевым
геном ГММ, - методом иммуноблота.
     5.10.11.5. Проводится  определение  наличия-отсутствия плазмид
(при дополнительном контроле).
     5.10.12. Гигиеническая оценка пищевых продуктов, полученных из
/ или с использованием ГММ или МГМА,  проводимая при дополнительном
контроле,  включает  выборочный  контроль  образцов на соответствие
требованиям настоящих Санитарных правил по  санитарно-химическим  и
санитарно-микробиологическим  показателям  качества  и безопасности
или другие исследования в соответствии с таблицами 5 и 6.
     5.10.13. Алгоритмы    проведения   лабораторных   исследований
образцов пищевой  продукции  предусматривают  3  варианта  действий
исходя    из    информации    о    принадлежности    использованных
микроорганизмов к МГМА или к ГММ:
     1) исследования  образцов пищевой продукции,  содержащей живые
микроорганизмы,  имеющие  генно-инженерно-модифицированные  аналоги
(МГМА);
     2) исследования образцов пищевой продукции,  содержащей  живые
генно-инженерно-модифицированные микроорганизмы (ГММ);
     3) исследования   образцов   пищевой   продукции,   содержащей
нежизнеспособные  генно-инженерно-модифицированные микроорганизмы и
микроорганизмы, имеющие генно-инженерно-модифицированные аналоги, а
также освобожденной от технологической микрофлоры.
     5.10.14. Алгоритм лабораторного исследования образцов  пищевой
продукции, содержащей живые МГМА, предусматривает следующее:
     5.10.14.1. Исследованиям подлежат образцы пищевых продуктов  и
сырья  I  и  II групп (таблица 1),  полученные с использованием или
содержащие живые МГМА. Порядок действий при проведении исследований
указан в таблице 7.

                                                          Таблица 7

          Алгоритм лабораторного исследования продукции,
                       содержащей живые МГМА

+-----------------------------------------------------------------+
| Испытуемые|  Содержание      |  Результат        |      Решение |
|   образцы | исследований     | исследований      |              |
+-----------+------------------+-------------------+--------------|
| Продукты  | 1. Определение   | 1. Количество     |Положительное |
| I и II    | количества       | микроорганизмов   |заключение по |
| групп     | жизнеспособных   | в продукте        |результатам   |
|           | МГМА             | соответствует     |исследований  |
|           | технологической  | нормируемому или  |              |
|           | микрофлоры       | заявляемому       |              |
|           | в 1 г продукта   | изготовителем     |              |
|           |                  | уровню            |              |
|           +------------------+-------------------+--------------|
|           | 2. Подтверждение | 2. Подтверждена   |              |
|           | родовой и/или    | родовая или       |              |
|           | видовой          | видовая           |              |
|           | принадлежности   | принадлежность    |              |
|           | микроорганизма   | микроорганизма    |              |
|           |                  | согласно          |              |
|           |                  | представленной    |              |
|           |                  | заявителем        |              |
|           |                  | документации      |              |
|           +------------------+-------------------+--------------|
|           | 3. Выявление в   | 3. Отсутствуют    |              |
|           | образце пищевого | ДНК маркерных     |              |
|           | продукта ДНК     | генов,            |              |
|           | маркерных        | плазмидная ДНК    |              |
|           | векторных генов  |                   |              |
|           | (например, генов |                   |              |
|           | антибиотикоре-   |                   |              |
|           | зистентности)    |                   |              |
|           +------------------+-------------------+--------------|
|           | 4. Анализ        | 4. Не выявлено    |              |
|           | дополнительных   | любых признаков,  |              |
|           | показателей      | неблагоприятных   |              |
|           | качества и       | для потребителей  |              |
|           | безопасности     |                   |              |
|           | пищевого         |                   |              |
|           | продукта         |                   |              |
|           | (п. 5.6.1)       |                   |              |
+-----------+------------------+-------------------+--------------|
| Продукты  | 1. Определение   | 1. Количество     |Отрицательное |
| I и II    | количества       | микроорганизмов   |заключение по |
| групп     | жизнеспособных   | в продукте не     |результатам   |
|           | МГМА             | соответствует     |исследований  |
|           | технологической  | нормируемому      |              |
|           | микрофлоры       | или заявляемому   |              |
|           | в 1 г продукта   | изготовителем     |              |
|           |                  | уровню            |              |
|           +------------------+-------------------+--------------|
|           | 2. Подтверждение | 2. Не подтверждена|              |
|           | родовой и/или    | родовая или       |              |
|           | видовой          | видовая           |              |
|           | принадлежности   | принадлежность    |              |
|           | микроорганизма   | микроорганизма    |              |
|           +------------------+-------------------+--------------|
|           | 3. Выявление в   | 3. Обнаружена ДНК |              |
|           | образце пищевого | маркерных генов   |              |
|           | продукта ДНК     |                   |              |
|           | маркерных        |                   |              |
|           | векторных генов  |                   |              |
|           | (например, генов |                   |              |
|           | антибиотико-     |                   |              |
|           | резистентности)  |                   |              |
|           +------------------+-------------------+--------------|
|           | 4. Анализ        | 4. Обнаружены     |              |
|           | дополнительных   | факторы           |              |
|           | показателей      | патогенности,     |              |
|           | качества и       | плазмидная ДНК    |              |
|           | безопасности     | или несоответствие|              |
|           | пищевого         | регламентам       |              |
|           | продукта         | безопасности      |              |
|           |                  | настоящих         |              |
|           |                  | Санитарных правил |              |
+-----------------------------------------------------------------+

     5.10.15. Алгоритм  лабораторного исследования образцов пищевой
продукции,  содержащей живые ГММ (пищевые продукты и сырье I  и  II
групп,  полученных  с  использованием  или  содержащих  живые  ГММ,
зарегистрированные в Российской Федерации), включает:
     5.10.15.1. Определение     количества    жизнеспособных    ГММ
технологической  микрофлоры  в  1  г  продукта;   если   выявленные
количества не ниже нормируемого или заявляемого изготовителем в НТД
уровня, то перейти к п. 5.10.15.2.
     5.10.15.2. Выявление  и  идентификация живых ГММ в исследуемом
образце  микробиологическими  методами.  Если  выявлены   ГММ,   не
соответствующие декларации изготовителя,  перейти к п.  5.10.15.13,
если  выявлены  ГММ,  соответствующие   указанным   в   технической
документации  на  продукт  и  паспорту,  прилагаемому  к  справке о
депонировании,  перейти к п.  5.10.15.4,  параллельно с  испытуемым
штаммом  ГММ  из  образца  продукции  исследуется референс-штамм из
депозитария (коллекции культур).
     5.10.15.4. Необходимо   убедиться,   что   микроорганизм-донор
целевого гена и микроорганизм-реципиент этого гена являются  хорошо
изученными,   разрешенными   и   давно   используемыми   в  пищевой
промышленности,  в таком случае - перейти к п.  5.10.15.5,  если не
являются, - перейти к п. 5.10.15.13.
     5.10.15.5. Подтверждение  родовой  и  видовой   принадлежности
микроорганизма   с   помощью   ПЦР   -   анализа  генома  ГММ,  при
положительном результате перейти к п.  5.10.15.6, при отрицательном
- к п. 5.10.15.13.
     5.10.15.6. Выявление      маркерных      генов      (векторных
последовательностей,   селективных   маркеров,  последовательностей
"ori", ауксотрофных последовательностей). В случае выявления только
заявленных   маркерных   последовательностей   перейти   к   пункту
5.10.15.7,    в    случае    выявления    незаявленных    маркерных
последовательностей перейти к пункту 5.10.15.13.
     5.10.15.7. Выявление     генов      антибиотикорезистентности,
кодирующих устойчивость к антибиотикам,  имеющим важное клиническое
значение в медицине и ветеринарии, если указанные гены выявлены, то
перейти  к  пункту 5.10.15.13,  если не выявлены,  перейти к пункту
5.10.15.8.
     5.10.15.8. Выявление  целевого  гена методом ПЦР с последующим
подтверждением   нуклеотидного   состава   ампликона   с    помощью
рестрикционного  или  гибридизационного  анализа,  если целевой ген
выявлен,  перейти  к  п.  5.10.15.12,  если  не выявлен,  перейти к
п. 5.10.15.13.
     5.10.15.9. Определение     нуклеотидной     последовательности
целевого  гена  методом  секвенирования  и  сравнение  с заявленной
последовательностью  нуклеотидов,  если  результат   положительный,
перейти   к   п.  5.10.15.12,  если   отрицательный,   перейти    к
п. 5.10.15.13.
     5.10.15.10. Подтверждение  идентичности  продуктов  экспрессии
целевого гена заявленным на  уровне  и  РНК  (методом  ОТ-ПЦР)  или
методами  электрофореза  в  ПААГ  и иммуноблотинга,  если результат
положительный, перейти к п. 5.10.15.12, если отрицательный, перейти
к п. 5.10.15.13.
     5.10.15.11. Анализ  дополнительных  показателей   качества   и
безопасности пищевого продукта на соответствие настоящим Санитарным
правилам.  Если  продукт  соответствует   требованиям,  перейти   к
п. 5.10.15.12, если не соответствует, - к п. 5.10.15.13.
     5.10.15.12. Выдается   положительное   заключение,    согласно
которому   образец   продукта   оценивается   как   соответствующий
требованиям  настоящих  Санитарных  правил  в  части  требований  к
маркировке и информации.
     5.10.15.13. Выдается   отрицательное   заключение,    согласно
которому  образец  продукта  не  соответствует настоящим Санитарным
правилам, дальнейшие исследования прекращаются.
     5.10.16. Алгоритм  лабораторного исследования образцов пищевой
продукции II и III групп,  содержащих нежизнеспособные ГММ или МГМА
или освобожденных от технологической микрофлоры, включает:
     5.10.16.1. Выявление  роста   жизнеспособных   микроорганизмов
технологической  микрофлоры  и  штаммов-продуцентов  в  исследуемом
образце  и  их  идентификация  микробиологическими  методами.  Если
выявлены    живые   микроорганизмы-продуценты<1>,   соответствующие
указанным в технической документации на продукт,  или представители
близкородственных им микроорганизмов, которые не могут относиться к
посторонней остаточной микрофлоре, перейти к п. 5.10.16.10, если не
выявлены, - перейти к п. 5.10.16.2.
     5.10.16.2. Следует убедиться  путем  анализа  сопроводительной
документации,   получен   ли   штамм-продуцент   с   использованием
генно-инженерных технологий,  если штамм относится к ГММ, перейти к
п.  5.10.16.3, если нет, дальнейшие действия аналогичны указанным в
таблице 7.
     5.10.16.3. Следует убедиться,  являются ли микроорганизм-донор
целевого гена  (например,  гена,  кодирующего  синтез  фермента)  и
микроорганизм-реципиент   (штамм-продуцент)   хорошо  изученными  и
имеющими длительную историю  безопасного  использования  в  пищевой
промышленности.  Если  ГММ  имеет  такие характеристики,  перейти к
п. 5.10.16.4, если штаммы новые, перейти к п. 5.10.16.10.
     5.10.16.4. Провести тестирование наличия ДНК штамма-продуцента
в анализируемом образце  пищевого  продукта  и  присутствия  в  нем
родовых   и/или   видовых  последовательностей,  генов  маркеров  и
целевого гена.  Если ДНК микробного происхождения  в  анализируемом
образце    пищевого   продукта   не   обнаруживается   в   пределах
чувствительности  метода,  -  перейти  к  п.  5.10.16.9;   если   в
выделенной   ДНК   искомые   ДНК-мишени  обнаружены,   перейти    к
п. 5.10.16.5, если не обнаружены, перейти к п. 5.10.16.10.
     5.10.16.5. Конкретизировать    маркерные    гены,   кодирующие
устойчивость к антибиотикам,  имеющим важное клиническое значение в
медицине и ветеринарии,  если обнаружены,  перейти к п. 5.10.16.10,
если нет, перейти к п. 5,10.16.6.
     5.10.16.6. Определение     нуклеотидной     последовательности
целевого  гена  и  сравнение   с   заявленной   последовательностью
нуклеотидов,  если  не обнаружены искомые ДНК-мишени,  перейти к п.
5.10.16.7, если обнаружены, перейти к п. 5.10.16.9.
     5.10.16.7. Выявление   идентичности   белка,  экспрессируемого
целевым  геном  ГММ,  заявленному  белку   (ферменту)   с   помощью
электрофореза  в  ПААГ  и иммуноблота,  если выявлено соответствие,
перейти к п. 5.10.16.9, если не выявлено, перейти к п. 5.10.16.10.
     5.10.16.8. Анализ   дополнительных   показателей   качества  и
безопасности  пищевого  продукта  проводится   при   дополнительном
контроле согласно требованиям настоящих Санитарных правил.
     5.10.16.9. Принимается  решение,  согласно  которому   образец
продукта   оценивается  как  соответствующий  настоящим  Санитарным
правилам в части требований к маркировке и информации.
     5.10.16.10. Принимается  решение,  согласно  которому  образец
продукта оценивается как не  соответствующий  настоящим  Санитарным
правилам, дальнейшие исследования прекращены.
     5.11. По завершении испытаний образцов, экспертизы прилагаемой
документации,  обследования  производства  и  на  основании анализа
полученных результатов принимается решение о соответствии продукции
из ГММ (МГМА) требованиям санитарных правил к этикетированию.
     5.11.1. В  зависимости  от  результатов  решение   принимается
следующим образом:
     - при обнаружении в  образцах  пищевой  продукции  ГММ  (и/или
целевых генов ГММ,  продуктов экспрессии целевых генов) и/или МГМА,
соответствующих   декларации   изготовителя,    подтверждении    их
принадлежности    к   микроорганизмам-продуцентам,   заявляемым   в
технической  документации  и  допущенным  к  обороту  в  Российской
Федерации,  а также при отсутствии в пищевой продукции ДНК и белка,
но подтверждении  принадлежности  микроорганизмов-продуцентов  этой
продукции,  заявляемых  в  технической  документации к допущенным к
обороту  в   Российской   Федерации   по   результатам   экспертизы
документации  или  дополнительным  испытаниям,  указанная продукция
признается соответствующей санитарным правилам;
     - при  наличии  в образцах пищевых продуктов,  полученных из /
или с использованием ГММ:
     а) ГММ (и/или целевых генов ГММ,  продуктов экспрессии целевых
генов,  селективных маркеров ГММ),  не  соответствующих  декларации
изготовителя,   не   заявленных   в  технической  документации,  не
зарегистрированных  и  не  допущенных  к   обороту   в   Российской
Федерации;
     б) ГММ или селективных маркеров ГММ, плазмидной ДНК в образцах
традиционной   пищевой   продукции,   полученной   из   /   или   с
использованием МГМА;
     в) генов    трансмиссивной   антибиотикорезистентности   и/или
факторов (маркеров) патогенности в образцах  пищевой  продукции  из
ГММ и МГМА;
     г) токсичности,    генотоксичности,    остаточных    количеств
антибиотиков,  микотоксинов  и других чужеродных веществ в образцах
пищевой продукции, полученных из / или с использованием ГММ и МГМА;
     принимается решение   о  несоответствии  продукции  санитарным
правилам.
     5.12. В   разделе   "Гигиеническая  характеристика  продукции"
санитарно-эпидемиологических  заключений,  выдаваемых  на   пищевую
продукцию,  полученную  из  /  или  с  использованием ГММ,  в графе
"Вещества,  показатели (факторы)"  дополнительно  вводится  строка:
"ГММ".  Соответственно,  в  графе  "Гигиенический  норматив" данной
строки указывается отношение данной продукции к ГММ, а именно:
     - "Содержится  ГММ  (наименование  штамма  и конкретной генной
модификации)";
     - "Получен   с   использованием  ГММ  (наименование  штамма  и
конкретной генной модификации)".
     5.12.1. В  зависимости от состояния технологической микрофлоры
в продукте формы записей в санитарно-эпидемиологических заключениях
на  пищевую  продукцию,  полученную  из / или с использованием ГММ,
должны предусматривать:
     при наличии    в    пищевом    продукте    жизнеспособных    и
нежизнеспособных ГММ -  указание  на  родовое  и  видовое  название
использованных(ой) для производства пищевой продукции культур(ы) на
латинском языке, а также на номер штамма;
     для продукции,      вырабатываемой      при      использовании
микроорганизмов-продуцентов,  но освобожденной от  них  в  процессе
технологии,   -   сведения   о  штамме  -  источнике  происхождения
продукции.
     5.12.2. Образцы    записей    в   санитарно-эпидемиологических
заключениях на продукцию, полученную из / или с использованием ГММ,
приведены в таблице 8.
     _______________
     <1> За  исключением  случаев,  когда проводятся дополнительные
исследования по идентификации для подтверждения родовой  и  видовой
принадлежности   референтного   штамма  из  депозитария  (коллекции
культур).

                                                          Таблица 8

   Варианты оформления санитарно-эпидемиологического заключения
          в части требований к технологической микрофлоре

+-----------------------------------------------------------------+
|   Вещества, показатели (факторы)|     Гигиенический норматив    |
|                                 |    (СанПиН, МДУ, ПДК и др.)   |
+-----------------------------------------------------------------|
|Вариант 1.  Вспомогательное технологическое  средство  -  порошок|
|чистой культуры спиртовых дрожжей Saccharomyces cerevisiae Y-1986|
|для производства спирта из крахмалосодержащего сырья             |
+-----------------------------------------------------------------|
|ГММ: Содержит генно-инженерно-   |Saccharomyces cerevisiae  штамм|
|модифицированный штамм           |Y-1986 с геном альфа-амилазы из|
|                                 |Bacillus     licheniformis    в|
|                                 |                       10      |
|                                 |количестве   1   х   10   КОЕ/г|
|                                 |продукта, не менее             |
+-----------------------------------------------------------------|
|Вариант 2.  Агаровая  культура  -   продуцент   фермента   липазы|
|Aspergillus oryzae на основе ГММ                                 |
+-----------------------------------------------------------------|
|ГММ: Содержит генно-инженерно-   |Состоит из  Aspergillus  oryzae|
|модифицированный штамм           |штамм АТСС-92341 с геном липазы|
|                                 |триацилглицерина  из   Humicola|
|                                 |lanuginosa                     |
+-----------------------------------------------------------------|
|Вариант 3.  Пищевая  добавка   -   ферментный   препарат   "ХХХХ"|
|альфа-амилазы   микробного   происхождения  для  крахмалопаточной|
|промышленности                                                   |
+-----------------------------------------------------------------|
|ГММ: Получен с использованием    |Bacillus amyloliquefaciens  шт.|
|генно-инженерно-модифицированного|ЕВА-1 с геном альфа-амилазы  из|
|штамма                           |Bacillus  amyloliquefaciens шт.|
|                                 |BZ53 в 1 продукта - отсутствуют|
+-----------------------------------------------------------------+

     5.13. В  этикеточных  надписях  на  потребительских  упаковках
пищевых продуктов, полученных из / или с использованием ГММ, должна
содержаться информация о наличии ГММ,  предусмотренная пунктом 2.18
настоящих Санитарных правил.".


                          ______________